Тетрациклина гидрохлорид

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 

 

 

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

 

Тетрациклина гидрохлорид		ФС.2.1.0591
Тетрациклин
Tetracyclini hydrochloridum		Взамен ФС 42-2519-97

 

 

C22H24N2O8·HCl	М.м. 480,90
[64-75-5]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(4S,4aS,5aS,6S,12aS)-3,6,10,12,12a-Пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,11-диоксо-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-октагидротетрацен-2-карбоксамида гидрохлорид.

Cодержит не менее 95,0 % и не более 102,0 % тетрациклина гидрохлорида C₂₂H₂₄N₂O₈·HCl в пересчёте на сухое вещество.

*Субстанция образуется определёнными штаммами Streptomyces aerofaciens или получается другими способами.

СВОЙСТВА

Описание. Жёлтый кристаллический порошок.

Растворимость. Легко растворим или растворим в воде, умеренно растворим в спирте 96 %, практически нерастворим в ацетоне.

*Растворяется в растворах щелочей и карбонатов.

*Водные растворы при стоянии мутнеют вследствие осаждения тетрациклина основания.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см⁻¹ по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца тетрациклина гидрохлорида.

2. Тонкослойная хроматография (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля октадецилсилильного F₂₅₄.

Подвижная фаза (ПФ). Ацетонитрил—метанол—щавелевой кислоты раствор 0,5 М, доведённый до рН 2 аммиака раствором концентрированным 25 % 20:20:60.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца тетрациклина гидрохлорида. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мг фармакопейного стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мг фармакопейного стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, 5 мг демеклоциклина гидрохлорида и 5 мг окситетрациклина гидрохлорида, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора, раствора стандартного образца тетрациклина гидрохлорида и раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы. Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы должны обнаруживаться три чётко разделённые зоны адсорбции.

Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, интенсивности поглощения и величине должна соответствовать зоне адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца тетрациклина гидрохлорида.

3. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика тетрациклина на хроматограмме раствора стандартного образца тетрациклина гидрохлорида (раздел «Количественное определение»).

4. Качественная реакция. Растворяют 2 мг субстанции в 5 мл серной кислоты концентрированной; должно появиться фиолетово-красное окрашивание. После прибавления 2,5 мл воды окраска должна измениться на жёлтую.

5. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию А на хлориды (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От –240 до –255 в пересчёте на сухое вещество (1 % раствор субстанции в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты, ОФС «Оптическое вращение»).

Оптическая плотность. Оптическая плотность испытуемого раствора, измеренная при длине волны 430 нм в кювете с толщиной слоя 1 см (относительно раствора сравнения), в течение 1 ч после приготовления раствора, не должна превышать 0,5 (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. Хлористоводородной кислоты раствор 0,01 М.

pH раствора. От 1,8 до 2,8 (1 % раствор, ОФС «Ионометрия»,метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Растворы используют свежеприготовленными.

Раствор дикалия гидрофосфата. В химический стакан вместимостью 1000 мл помещают 35 г дикалия гидрофосфата, растворяют в воде, доводят значение рН фосфорной кислотой разведённой 10 % до 9,00, переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор тетрабутиламмония гидросульфата. В химический стакан вместимостью 1000 мл помещают 10 г тетрабутиламмония гидросульфата, растворяют в воде, доводят значение рН натрия гидроксида раствором 8,5 % до 9,00, переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор динатрия эдетата. В химический стакан вместимостью 1000 мл помещают 40 г динатрия эдетата дигидрата, растворяют в воде, доводят значение рН натрия гидроксида раствором 8,5 % до 9,00, переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Подвижная фаза (ПФ). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают раствор 80,0 г трет-бутилового спирта в 200 мл воды, прибавляют 100 мл раствора дикалия гидрофосфата, 200 мл раствор тетрабутиламмония гидросульфата, 10 мл раствора динатрия эдетата и доводят объём раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца тетрациклина гидрохлорида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси A. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 15 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси A, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси C. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси C, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси D. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси D, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 20,0 мл раствора стандартного образца примеси A, 10,0 мл раствора стандартного образца примеси C, 5,0 мл раствора стандартного образца примеси D и доводят объём раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, 2,0 мл раствора стандартного образца примеси A, 5,0 мл раствора стандартного образца примеси D и доводят объём раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца примеси C и доводят объём раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М до метки.

Примечание

Примесь A (4-эпитетрациклин): 4R,4aS,5aS,6S,12aS)-3,6,10,12,12a-пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,11-диоксо-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-октагидротетрацен-2-карбоксамид [79-85-6].

Примесь В (2-ацетил-2-декарбамоилтетрациклин): (4S,4aS,5aS,6S,12aS)-2-ацетил-3,6,10,12,12a-пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-4a,5a,6,12a-тетрагидротетрацен-1,11(4H,5H)-дион [6542-44-5].

Примесь С (ангидротетрациклин): (4S,4aS,12aS)-3,10,11,12a-тетрагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,12-диоксо-1,4,4a,5,12,12a-гексагидротетрацен-2-карбоксамид [1665-56-1].

Примесь D (4-эпиангидротетрациклин): (4R,4aS,12aS)-3,10,11,12a-тетрагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,12-диоксо-1,4,4a,5,12,12a-гексагидротетрацен-2-карбоксамид [7518-17-4].

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,6 мм, сополимер стирол-дивинилбензол, 8 мкм;
Температура колонки	60°С;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 254 нм;
Объём пробы	20 мкл.

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей используются хроматограммы растворов для проверки пригодности и чувствительности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

- разрешение (R_S) между пиками примеси A (пик 1) и тетрациклина (пик 2) должно быть не менее 2,5;

- разрешение (R_S) между пиками тетрациклина (пик 2) и примеси D (пик 3) должно быть не менее 8,0:

- фактор асимметрии пика (A_S) тетрациклина должен быть не более 1,25;

- на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для основного пика должно быть не менее 3.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси A не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 3,0 %);

- площадь пика примеси B (выходит на хвосте основного пика) не должна превышать 0,5 площади пика примеси A на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,5 %);

- площадь пика примеси C не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %);

- площадь пика примеси D не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %).

Потеря в массе при высушивании. Не более 2,0 % (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 2). Высушивают в вакууме до постоянной массы 1 г (точная навеска) субстанции при температуре 60°С и остаточном давлении не превышающем 5 мм рт. ст.

Сульфатная зола. Не более 0,5 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 3А), в зольном остатке, полученном после сжигания 1 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

**Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС «Аномальная токсичность»). Тест-доза – 1 мг тетрациклина в 0,5 мл воды для инъекций на мышь. Срок наблюдения 48 ч.

**Бактериальные эндотоксины. Не более 0,5 ЕЭ/мг тетрациклина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор стандартного образца тетрациклина гидрохлорида.

Содержание тетрациклина гидрохлорида C₂₂H₂₄N₂O₈·HCl в субстанции в процентах (Х) в пересчёте на сухое вещество вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика тетрациклина на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика тетрациклина на хроматограмме раствора стандартного образца тетрациклина гидрохлорида;
	а1	–	навеска субстанции, мг;
	а0	–	навеска фармакопейного стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, мг;
	W	–	потеря в массе при высушивании, %;
	P	–	содержание тетрациклина гидрохлорида в фармакопейном стандартном образце тетрациклина гидрохлорида, %.

ХРАНЕНИЕ

В плотно укупоренной упаковке в защищённом от света месте.

 

*Приводится для информации.

**Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.