Инозин пранобекс

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 

 

 

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

 

Инозин пранобекс		ФС.2.1.0425
Инозин пранобекс
Inosinum pranobexum		Вводится впервые

 

 

C10H12N4O5·(C14H22N2O4)3	М.м. 1115,3
[36703-88-5]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

9-(β-D-Рибофуранозил)-1,9-дигидро-6H-пурин-6-она и 4-ацетамидобензоат (2RS)-2-гидрокси-N,N-диметилпропан-1-аминия (1:3).

Cодержит не менее 22,8 % и не более 25,2 % инозина C₁₀H₁₂N₄O₅ и не менее 72,2 % и не более 79,8 % 4-ацетамидобензоат (2RS)-2-гидрокси-N,N-диметилпропан-1-аминия C₁₄H₂₂N₂O₄ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Легко растворим в воде, очень мало растворим или практически нерастворим в метаноле.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ВЭЖХ. Время удерживания двух основных пиков на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пиков инозина и 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора (раздел «Количественное определение»).

2. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,15 г (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 200 до 300 нм должен иметь максимум при 261 нм.

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность раствора. Раствор 10 г субстанции в 100 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности )жидкостей»).

рН раствора. От 6,0 до 7,0 (10 % раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза А (ПФА). Растворяют 2,65 г дикалия гидрофосфата в 800 мл воды, доводят значение рН фосфорной кислотой концентрированной до 2,5, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Подвижная фаза Б(ПФБ). Метанол.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 100 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси 1. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси 1, растворяют в 4 мл аммиака раствора 4 % и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца примеси 2. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси 2, растворяют в 10 мл метанола и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 1, 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 2 и 1,0 мл раствора стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 24 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца инозина, растворяют в 50 мл воды, прибавляют 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 1, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают на магнитной мешалке в течение 10 мин.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 4,4 мг фармакопейного стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Примечание

Примесь 1: 1,7-дигидро-6Н-пурин-6-он [68-94-0].

Примесь 2: 4-аминобензойная кислоты [150-13-0].

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, деактивированный по отношению коснованиям, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	25 °С;
Скорость потока	0,7 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 254 нм;
Объём пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА,%	ПФБ, %
0–4,0	83	17
4,0–4,1	83 → 60	17 → 40
4,1–40,0	60	40
40,0–40,1	60 → 83	40 → 17
40,1–55,0	83	17

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, стандартный раствор и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Инозин – 1 (около 6 мин); примесь 1 – около 0,9; примесь 2 – около 1,9; 4-ацетамидобензойная кислота – около 3.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примеси 1 и примеси 2 используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму стандартного раствора.

Пригодность хроматографической системы

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика 4-ацетамидобензойной кислоты должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками инозина и гипоксантина должно быть не менее 2,0.

На хроматограмме стандартного раствора фактор асимметрии пика (A_S) примеси 1, 4-ацетамидобензойной кислоты и примеси 2 должен быть не более 1,5;

Содержание примеси 1 в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	S1	-	площадь пика гипоксантина на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	-	площадь пика гипоксантина на хроматограмме стандартного раствора;
	a0	-	навеска фармакопейного стандартного образца гипоксантина, мг;
	a1	-	навеска субстанции, мг;
	P	-	содержание гипоксантина в фармакопейном стандартном образце гипоксантина, %;
	0,24	-	массовая доля инозина в субстанции.

Содержание примеси 2 в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	S1	-	площадь пика 4-аминобензойной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	-	площадь пика 4-аминобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора;
	a0	-	навеска стандартного образца 4-аминобензойной кислоты, мг;
	a1	-	навеска субстанции, мг;
	P	-	содержание4-аминобензойной кислоты в стандартном образце4-аминобензойной кислоты, %;
	0,48	-	массовая доля 4-ацетамидобензойной кислоты в субстанции.

Содержание любой другой примеси в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	S1	-	площадь пика любой неидентифицированной примеси на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	-	площадь пика 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора;
	a0	-	навеска стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, мг;
	a1	-	навеска субстанции, мг;
	P	-	содержание 4-ацетамидобензойной кислоты в стандартном образце 4-ацетамидобензойной кислоты, %.

Допустимое содержание примесей:

- примесь 1 – не более 0,2 %;

- примесь 2 – не более 0,2 %;

- любая другая примесь – не более 0,1 %;

- сумма примесей – не более 0,5 %.

Не учитывают пики, площадь которых менее площади пика 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,025 %).

Вода. Не более 0,5 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,3 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,001 %.Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы»(метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

1. Инозин и 4-ацетамидобензойная кислота. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС«Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза (ПФ). Смешивают 800 мл воды, 6,8 мл фосфорной кислоты концентрированной и 50 мл метанола. Количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл, помещают в ледяную баню, доводят значение рН натрия гидроксида раствором 5 М до 7,0 и доводят объём раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,2 г (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём ПФ до метки.

Раствор стандартного образца инозина. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 60 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца инозина, растворяют в ПФ и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 120 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного образца инозина и 5,0 мл раствора стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25,0 мл полученного раствора и доводят объём ПФ до метки.

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 10 мкм;
Температура колонки	25 °С;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 254 нм;
Объём пробы	20 мкл;
Время хроматографирования	2,5-кратное от времени удерживания пика 4-ацетамидобензойной кислоты.

Хроматографируют стандартный раствор и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. 4-ацетамидобензойная кислота – около 8 мин; инозин – около 13 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора:

- разрешение (R_S) между пиками 4-ацетамидобензойной кислоты и инозина должно быть не менее 3,0;

- фактор асимметрии пика (A_S) 4-ацетамидобензойной кислоты и инозина должен быть не более 2,0.

Содержание 4-ацетамидобензойной кислоты C₉H₉NO₃ и инозина C₁₀H₁₂N₄O₅ в субстанции в пересчёте на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество в процентах () вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика инозинаили 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора;
	а1	–	навеска субстанции, мг;
	а0	–	навеска фармакопейного стандартного образца инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты, мг;
	P	–	содержание инозина в фармакопейном стандартном образце инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты в фармакопейном стандартном образце ацетамидобензойной кислоты, %;
	W	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

2. N,N-диметиламино-2-пропанол. Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).

Растворяют 0,25 г (точная навеска) субстанции в 40 мл воды и титруют 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты соответствует 10,317 мг N,N-диметиламино-2-пропанола C₅H₁₃NO.

ХРАНЕНИЕ

В защищённом от света месте.