Флударабина фосфат

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 

 

 

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

 

Флударабина фосфат		ФС.2.1.0367
Флударабин
Fludarabini phosphas		Вводится впервые

 

 

C10H13FN5O7P	М.м. 365,21
[75607-67-9]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

9-(5-O-Фосфоно-β-D-арабинофуранозил)-2-фтор-9H-пурин-6-амин.

Cодержит не менее 97,0 % и не более 102,0 % флударабина фосфата C₁₀H₁₃FN₅O₇P в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок. *Гигроскопичен.

Растворимость. Легко растворим в диметилформамиде, мало растворим в воде, практически нерастворим в этаноле.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции, в области от 4000 до 400 см^–1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата.

2. ВЭЖХ. Время удерживания пика основного вещества на хроматограмме испытуемого раствора Б должно соответствовать времени удерживания пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (А) (раздел «Количественное определение»).

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +10,0 до +14,0 в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество (ОФС «Оптическое вращение»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,1 г (точная навеска) субстанции, прибавляют 15 мл воды, обрабатывают ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора водой до метки.

Прозрачность раствора. Раствор должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Испытуемый раствор. Растворяют 50 мг субстанции в 5 мл диметилформамида, при необходимости обрабатывая ультразвуком.

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном BY₅ (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

рН раствора. От 2,0 до 4,0 (0,1 % раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»). Все растворы используют сразу после приготовления.

Допустимое содержание примесей:

- сумма неидентифицированных примесей – не более 0,5 %;

- сумма всех примесей определенных в тестах 1 и 2 – не более 2,0 %.

1. Примеси, элюирующиеся до основного пика

Подвижная фаза (ПФ). Метанол—калия дигидрофосфата раствор 0,01 М 60:940.

Испытуемый раствор А. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 30 мл ПФ, обрабатывают ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора ПФ до метки.

Испытуемый раствор Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора А и доводят объём раствора ПФ до метки.

Раствор стандартного образца флударабина фосфата (А). Помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл ПФ, обрабатывают ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора ПФ до метки.

Раствор стандартного образца флударабина фосфата (Б). В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца флударабина фосфата (А) и доводят объём раствора ПФ до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, прибавляют 10 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М, нагревают на водяной бане при температуре 80 °С в течение 15 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б) и доводят объём раствора ПФ до метки.

Примечание

Примесь А: 6-амино-9-(5-O-фосфоно-β-D-арабинофуранозил)-1,9-дигидро-2H-пурин-2-он [62314-92-5].

Примесь В: 6-амино-1,7-дигидро-2H-пурин-2-он [3373-53-3].

Примесь С: 9-(3,5-ди-O-фосфоно-β-D-арабинофуранозил)-2-фтор-9H-пурин-6-амин [548774-53-4].

Хроматографические условия

Колонка	150 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, совместимый с водной подвижной фазой, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	20 °С;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 260 нм;
Объём пробы	10 мкл;
Время хроматографирования	4,5-кратное от времени удерживания пика флударабина фосфата.

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор стандартного образца флударабина фосфата (А), раствор стандартного образца флударабина фосфата (Б) и испытуемый раствор А.

Относительное время удерживания соединений. Флударабина фосфат – 1 (около 9 мин); примесь A – около 0,26; примесь B – около 0,34; примесь C – около 0,42.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси C используется хроматограмма раствора стандартного образца флударабина фосфата (А). В случае возникновения затруднений при идентификации пиков примесей А и В хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы при длине волны 292 нм.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика флударабина фосфата должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками примеси А и примеси В должно быть не менее 2,0 (при длине волны 292 нм).

На хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б):

- фактор асимметрии пика (A_s) флударабина фосфата должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение площади пика флударабина фосфата должно быть не более 2,0 % (6 определений).

Поправочные коэффициенты. Для расчёта содержания площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь A – 4,0; примесь B – около 2,5; примесь C – 1,9.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	S1	-	площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора А;
	S0	-	площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б);
	a0	-	навеска фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, мг;
	a1	-	навеска субстанции, мг;
	P	-	содержание флударабина фосфата в фармакопейном стандартном образце флударабина фосфата, %.

Допустимое содержание примесей:

- примесь A – не более 0,8 %;

- примесь C – не более 0,4 %;

- примесь B – не более 0,2 %;

- любой другой примеси – не более 0,1 %.

Не учитывают пики, элюирующиеся после пика флударабина фосфата, и пики менее 0,05 %.

2. Примеси, элюирующиеся после основного пика. Определение проводят в условиях испытания «Родственные примеси. Примеси, элюирующиеся до основного пика» со следующими изменениями.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол—калия дигидрофосфата раствор 0,01 М 200:800.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца флударабина для пригодности системы, содержащего примеси D, E и F, прибавляют 7 мл ПФ, обрабатывают ультразвуком до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объём раствора ПФ до метки.

Примечание

Примесь D: 2-фтор-7H-пурин-6-амин [700-49-2].

Примесь E: 9-(β-D-арабинофуранозил)-2-фтор-9H-пурин-6-амин [21679-14-1].

Примесь F: 9-(5-O-фосфоно-β-D-арабинофуранозил)-2-этокси-9H-пурин-6-амин [159002-28-5].

Хроматографические условия

Время хроматографирования

8-кратное от времени удерживания пика флударабина фосфата.

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор стандартного образца флударабина фосфата (Б) и испытуемый раствор А.

Относительное время удерживания соединений. Флударабина фосфат – 1 (около 2,5 мин); примесь D – около 1,5; примесь E – около 1,9; примесь F – около 2,5.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика флударабина фосфата должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_s) между пиками флударабина фосфата и примеси D должно быть не менее 5,0.

На хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б):

- относительное стандартное отклонение площади пика флударабина фосфата должно быть не более 5,0 % (6 введений);

- фактор асимметрии пика (A_s) флударабина фосфата должен быть не более 2,0.

Поправочные коэффициенты. Для расчёта содержания площади пиков следующих примесей умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь D – 0,5; примесь E – около 0,6; примесь F – 1,8.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	S1	-	площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора А;
	S0	-	площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (Б);
	a0	-	навеска фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, мг;
	a1	-	навеска субстанции, мг;
	P	-	содержание флударабина фосфата в фармакопейном стандартном образце флударабина фосфата, %.

Допустимое содержание примесей:

- примесь E – не более 0,2  %;

- примесь F – не более 0,2 %;

- примесь D – не более 0,15 %;

- любой другой примеси – не более 0,1 %.

Не учитывают пики, элюирующиеся до пика флударабина фосфата, и пики менее 0,05 %.

Вода. Не более 3,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,1 г (точная навеска) тонкоизмельчённой субстанции. Перед титрованием субстанцию взбалтывают с 30 мл метанола безводного в течение 30 с.

Натрий. Не более 0,2 %. Определение проводят методом атомно-эмиссионной спектрометрии с пламенной атомизацией (ОФС «Атомно-эмиссионная спектрометрия»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 0,5084 г натрия хлорида, предварительно высушенного при 105 °С до постоянной массы, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Контрольный раствор. Вода.

Определяют атомную эмиссию стандартного и испытуемого растворов на линии спектра излучения натрия при длине волны 589,0 нм.

Отклик эмиссии испытуемого раствора не должен превышать отклик эмиссии стандартного раствора.

Фосфаты. Не более 0,1 % (ОФС «Фосфаты»). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

Хлориды. Не более 0,2 % (ОФС «Хлориды). Растворяют 10 мг субстанции в 10 мл воды.

Тяжёлые металлы. Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы»(метод 3Б), в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

**Бактериальные эндотоксины. Не более 4,0 ЕЭ на 1 мг флударабина фосфата (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси. Примеси, элюирующиеся до основного пика» со следующими изменениями.

Хроматографические условия

Время хроматографирования

18 мин.

Хроматографируют раствор стандартного образца флударабина фосфата (А) и испытуемый раствор Б.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (А):

- фактор асимметрии пика (A_s) флударабина фосфата должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение площади пика флударабина фосфата должно быть не более 2,0 % (6 введений);

- относительное стандартное отклонение времени удерживания пика флударабина фосфата должно быть не более 2,0 % (6 введений);

- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику флударабина фосфата, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.

Содержание флударабина фосфата C₁₀H₁₃FN₅O₇P в субстанции в процентах (X) в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:

где	S1	-	площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме испытуемого раствора Б;
	S0	-	площадь пика флударабина фосфата на хроматограмме раствора стандартного образца флударабина фосфата (А);
	a0	-	навеска фармакопейного стандартного образца флударабина фосфата, мг;
	a1	-	навеска субстанции, мг;
	W	–	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;
	P	-	содержание флударабина фосфата в фармакопейном стандартном образце флударабина фосфата, %.

ХРАНЕНИЕ

В сухом, защищённом от света месте, при температуре от +2 до +8 °С.

 

*Приводится для информации.

**Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.