Азитромицин дигидрат

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 

 

 

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

 

Азитромицин дигидрат		ФС.2.1.0049
Азитромицин
Azithromycinum dihydricum		Взамен ФС.2.1.0049.18

 

 

 

C38H72N2O12·2H2O	М.м. 785,02
[117772-70-0]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10-Тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он дигидрат.

Cодержит не менее 96,0 % и не более 102,0 % азитромицина С₃₈H₇₂N₂O₁₂ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

1 мкг азитромицина С₃₈H₇₂N₂O₁₂ соответствует специфической активности, равной 1 единице действия (ЕД).

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый порошок.

Растворимость. Легко растворим в метиленхлориде и спирте 96 %, практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектроскопия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^–1 по положению полос поглощения соответствует спектру фармакопейного стандартного образца азитромицина.

Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и фармакопейный стандартный образец азитромицина по отдельности растворяют в минимальных объёмах метанола, выпаривают досуха, высушивают в вакууме при температуре 80 °С в течение 30 мин и записывают спектры сухих остатков.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика азитромицина на хроматограмме раствора стандартного образца азитромицина (раздел «Количественное определение»).

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От –45 до –49 в пересчёте на безводное, не содержащее органических растворителей вещество (2 % раствор субстанции в этаноле, ОФС «Оптическое вращение»).

Прозрачность раствора. Раствор 0,5 г субстанции в 50 мл этанола должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей»).

рН раствора. От 9,0 до 11,0 (0,1 г субстанции растворяют в 25 мл метанола и доводят объём водой до 50 мл, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Растворы, содержащие азитромицин и его примеси, используют свежеприготовленными.

Буферный раствор. Растворяют 1,73 г аммония дигидрофосфата в 900 мл воды и доводят рН раствора до 10,00 аммиака раствором концентрированным 25 %. Количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Подвижная фаза А (ПФА). Растворяют 1,80 г динатрия гидрофосфата безводного в 800 мл воды и доводят рН раствора до 8,90 фосфорной кислотой разведённой 10 % или натрия гидроксида раствором 10 %. Количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Метанол—ацетонитрил 250:750.

Растворитель. Ацетонитрил—буферный раствор—метанол 30:35:35.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,2 г (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор стандартного образца азитромицина. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 16 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца азитромицина, растворяют в растворителе и доводят объём раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. Растворяют содержимое флакона с фармакопейным стандартным образцом азитромицина для проверки пригодности хроматографической системы (содержит примеси F, H и J) в 1 мл растворителя, выдерживают на ультразвуковой бане в течение 5 мин и охлаждают до комнатной температуры.

Раствор для идентификации пиков примесей. Растворяют содержимое флакона с фармакопейным стандартным образцом азитромицина для идентификации примесей (содержит примеси A, B, C, E, F, G, I, J, L, M, N, O и Р) в 1 мл растворителя, выдерживают на ультразвуковой бане в течение 5 мин и охлаждают до комнатной температуры.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца азитромицина и доводят объём раствора растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,6 мм, кремнийорганический полимер, аморфный, октадецилсилильный, эндкепированный, 5 мкм;
Температура колонки	60 °С;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 210 нм;
Объём пробы	50 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0–25	50 → 45	50 → 55
25–30	45 → 40	55 → 60
30–80	40 → 25	60 → 75
80–81	25 → 50	75 → 50
81–93	50	50

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для идентификации пиков примесей, раствор стандартного образца азитромицина и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Относительное время удерживания (RRT) приведено в табл. 1.

Таблица 1 – Относительное время удерживания соединений (RRT)

Сокращённое название	Химическое название по ИЮПАК	CAS	RRT
Примесь А	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10-Тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,8,10,12,14-гексаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	76801-85-9	Около 0,83
Примесь В	(2R,3R,4S,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-4,10-Дигидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	307974-61-4	Около 1,31
Примесь С	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10-Тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	620169-47-3	Около 0,73
Примесь D	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10-Тригидрокси-14-гидроксиметил-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12-гексаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	612069-26-8	Около 0,54
Примесь E	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-11-[(3-Амино-3,4,6-тридезокси-b-D-ксило-гексопиранозил)окси]-3,4,10-тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	612069-27-9	Около 0,43
Примесь F	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10-Тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(N-метилформамидо)-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	612069-28-0	Около 0,51
Примесь G	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10-Тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(4,N-диметилбензол-1-сульфонамидо)-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	612069-31-5	Около 1,36
Примесь H	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-11-{[3-(4-Ацетамидо-N-метилбензол-1-сульфонамидо)-3,4,6-тридезокси-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-3,4,10-тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	612069-30-4	Около 0,79
Примесь I	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10-Тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(метиламино)-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	172617-84-4	Около 0,61
Примесь J	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10,13-Тетрагидрокси-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	117693-41-1	Около 0,54
Примесь L	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10-Тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметилоксо-λ5-азанил)-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	90503-06-3	Около 0,29
Примесь M	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10-Тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-11-[(3,4,6-тридезокси-3-формамидо-b-D-ксило-гексопиранозил)окси]-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	765927-71-7	Около 0,37
Примесь N	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10-Тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-11-[(3,4,6-тридезокси-3-оксо-b-D-ксило-гексопиранозил)окси]-2-этил-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	612069-25-7	Около 0,76
Азитромицин			1,00
Примесь O	(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10-Тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-a-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-2-пропил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-b-D-ксило-гексопиранозил]окси}-1-окса-6-азациклопентадекан-15-он	763924-54-5	Около 1,23
Примесь P	Неизвестная структура		Около 0,92

Хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу азитромицина для проверки пригодности хроматографической системы, и хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы используют для идентификации пиков примесей F, H и J. Хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу азитромицина для идентификации примесей, и хроматограмму раствора для идентификации пиков примесей используют для идентификации пиков примесей A, B, C, E, F, G, I, J, L, M, N, O и Р.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика азитромицина должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси J и примеси F должно быть не менее 3,0;

На хроматограмме раствора стандартного образца азитромицина:

- фактор асимметрии пика (A_S) азитромицина должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение площади пика азитромицина должно быть не более 5,0 % (6 введений).

Поправочные коэффициенты. Для расчёта содержания примесей площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь F – 0,3; примесь G – 0,2; примесь Н – 0,1; примесь L – 2,3; примесь М – 0,6; примесь N – 0,7.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика азитромицина на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика каждой из примесей на хроматограмме раствора стандартного образца азитромицина;
	a1	–	навеска субстанции, мг;
	a0	–	навеска фармакопейного стандартного образца азитромицина, мг;
	P	–	содержание азитромицина в фармакопейном стандартном образце азитромицина, %.

Допустимое содержание примесей:

- примесь В – не более 2,0 %;

- сумма примесей D, J и Q – не более 0,5 %;

- примесь G – не более 0,2 %;

- примеси А, С, Е, F, H, I, L, М, N, О, Р – не более 0,5 % каждая;

- любая другая примесь – не более 0,2 %;

- сумма примесей – не более 3,0 %.

Не учитывают пики, относительное время удерживания которых менее относительного времени удерживания примеси L и более относительного времени удерживания примеси В, а также пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05 %).

Вода. От 4,0 % до 6,0 % (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,2 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,0025 %. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Тяжёлые металлы» (метод 2) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Буферный раствор рН 8,0. Растворяют 6,7 г дикалия гидрофосфата в 900 мл воды и доводят рН раствора до 8,00 фосфорной кислотой концентрированной. Количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Буферный раствор рН 11,0. Растворяют 6,7 г дикалия гидрофосфата в 900 мл воды и доводят рН раствора до 11,00 калия гидроксида раствором 10 %. Количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Подвижная фаза (ПФ). Буферный раствор рН 11,0—ацетонитрил 400:600.

Растворитель. Буферный раствор рН 8,0—ацетонитрил 40:60.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в 2 мл ацетонитрила и доводят объём раствора растворителем до метки.

Раствор стандартного образца азитромицина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца азитромицина, растворяют в 2 мл ацетонитрила и доводят объём раствора растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,6 мм, винилполимер октадецилсилильный для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	40 °С;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 210 нм;
Объём пробы	10 мкл;
Время хроматографирования	1,5-кратное от времени удерживания пика азитромицина.

Хроматографируют раствор стандартного образца азитромицина и испытуемый раствор.

Время удерживания пика азитромицина – около 10 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца азитромицина:

- фактор асимметрии пика (A_S) азитромицина должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение площади пика азитромицина должно быть не более 2,0 % (6 введений).

Содержание азитромицина С₃₈H₇₂N₂O₁₂ в субстанции в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

где	S1	-	площадь пика азитромицина на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	-	площадь пика азитромицина на хроматограмме раствора стандартного образца азитромицина;
	а1	-	навеска субстанции, мг;
	а0	-	навеска фармакопейного стандартного образца азитромицина, мг;
	P	-	содержание азитромицина в фармакопейном стандартном образце азитромицина, %;
	W	-	суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В защищённом от света месте.