Определение содержания тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах

  МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 

 

 

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

 

Определение содержания тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах к)]		ОФС.1.5.3.0009
[		Взамен ОФС.1.5.3.0009.15

 

 

Определение содержания тяжёлых металлов и мышьяка проводят с использованием следующих методов: атомно-абсорбционной спектрометрии (метод 1), атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой (метод 2), масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой (метод 3).

Процедура определения содержания тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах состоит из следующих основных этапов:

1. Отбор пробы для определения остаточных пестицидов, тяжёлых металлов и мышьяка. Отбор пробы проводится в соответствии с требованиями ОФС «Отбор проб лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов» в условиях, исключающих дополнительное загрязнение сырья.

2. Подготовка пробы.

3. Определение содержания тяжёлых металлов и мышьяка в испытуемых пробах.

4. Определение соответствия лекарственного растительного сырья/препарата допустимым нормам.

Результаты, полученные при определении содержания тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье, распространяются на лекарственный растительный препарат, произведенный из данной партии лекарственного растительного сырья.

Лекарственные растительные препараты подвергаются выборочному контролю на содержание тяжёлых металлов и мышьяка не реже одного раза в год (одна серия каждого наименования).

Методики определения тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье/препаратах должны быть валидированы. Выбор методики измерения аналитического сигнала (по градуировочной кривой или методом «стандартных добавок») для конкретных объектов исследования определяется в ходе валидации методики.

Приготовление растворов осуществляют в мерной посуде класса А или 1 класса точности, а их хранение - в пластиковой посуде (PMP, PFA, PP).

Используемая вода должна быть деионизованной (деионизированной) на ионнообменных смолах и соответствовать требованиям, предъявляемым к воде очищенной. [Свободная строка, 1 интервал]

Предельно допустимое содержание тяжёлых металлов и мышьяка не должно превышать значений, приведенных в табл. 1, если иное не указано в фармакопейной статье (например, для ламинарии слоевищ предельно допустимое содержание мышьяка составляет 90 мг/кг).

Таблица 1 - Предельно допустимое содержание тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах

Элемент	Предельно допустимое содержание, мг/кг
Свинец Кадмий Ртуть Мышьяк	6,0 1,0 0,1 0,5

Примечание – В соответствии с требованиями безопасности, принятыми в Российской Федерации.

Метод 1

Оборудование. Определение содержания тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах проводят на атомно-абсорбционном спектрометре с различными атомизаторами пробы (пламенный, электротермический), а также методом «холодного пара» и генерации гидридов.

Подготовка лабораторной посуды включает следующие последовательные этапы: обычная мойка посуды с раствором моющего средства, тщательное ополаскивание проточной водой питьевой, затем замачивание в натрия гидроксида растворе 1 % и водорода пероксиде, ополаскивание проточной водой питьевой с последующим замачиванием в течение 1 ч в хлористоводородной кислоты растворе 10 %, либо обработка посуды азотной кислоты раствором 1 %, ополаскивание водой для хроматографии 3-4 раза, сушка.

Приготовление стандартных растворов тяжёлых металлов и мышьяка осуществляют в лабораторных условиях или используют готовые растворы стандартных образцов.

Пробоподготовка включает в себя предварительное измельчение пробы для определения остаточных пестицидов, тяжёлых металлов и мышьяка с целью приготовления однородного образца и последующего взятия не менее двух параллельных навесок, деструкцию органической матрицы для переведения ионов металлов и мышьяка в раствор.

При отборе проб следует избегать контакта лекарственного раститель­ного сырья/препарата с предметами, содержащими определяемые металлы. Загрязнение лабораторной посуды железом, хромом и никелем может происходить при контакте с нержавеющей сталью, свинцом - с резиной, кадмием - с некоторыми видами пластмасс. Эти загрязнения контрольным опытом не учитываются и могут давать заметное завышение результатов.

Пробу лекарственного раститель­ного сырья предварительно измельчают с помощью ножа или ножниц, затем в специальных лабораторных дробилках или мельницах-измельчителях и просеивают сквозь сито с размером отверстий 1 мм. Лекарственные растительные препараты, расфасованные в пачки, дополнительно измельчают и просеивают сквозь сито с размером отверстий 1 мм.

Лекарственные растительные препараты, расфасованные в фильтр-пакеты, дополнительно измельчают и просеивают сквозь сито с размером отверстий 1 мм.

Для дальнейшей подготовки к анализу рекомендуется использовать два метода подготовки пробы:

- сухая (термическая) минерализация;

- мокрая (кислотная)минерализация.

Пробоподготовка лекарственного раститель­ного сырья/препарата к анализу заключается в деструкции органической основы пробы методами «сухой» или «мокрой» минерализации с последующим растворением остатка в водных растворах кислот или кислотной экстракции (неполной минерализации). При недостаточной чувствительности проводят концентрирование токсичных элементов с последующим атомно-абсорбционным определением их в органических растворах.

Метод «сухой» минерализации основан на полном разложении органи­ческих веществ путем сжигания анализируемой пробы в муфельной печи при контролируемом температурном режиме.

Метод «мокрой» минерализации основан на полном разложении органических веществ пробы при нагревании в смеси концентрированных кислот. Проведение «мокрой» минерализации возможно в открытых системах (колбах Кьельдаля, стеклянных стаканах), либо в закрытых системах (например, автоклав, микроволновая система для пробоподготовки).

Метод пробоподготовки лекарственного растительного сырья/препарата к анализу выбирают в соответствии с аппаратурным оснащением аналитической лаборатории.

Проведение пробоподготовки с использованием различных систем минерализации проб рекомендуется проводить с валидацией по образцам с известным содержанием элементов.

Метод 1а («сухая» минерализация, свинец, кадмий)

Помещают 2,5 г (точная навеска) испытуемого образца в фарфоровый, стеклоуглеродный, кварцевый или другой тигель и устанавливают в холодную муфельную печь. Озоление испытуемых образцов проводят постепенно, поднимая температуру печи на 50 °С каждые 30 мин (во избежание воспламенения) до 480 °С, выдерживают в печи до полного озоления образца. После охлаждения пробу переносят во фторопластовый стакан, прибавляют 5 мл азотной кислоты концентрированной, свободной от свинца и кадмия, и оставляют на ночь. Затем нагревают пробу на электрической плитке и выпаривают до сухого остатка, после чего добавляют 1 мл фтористоводородной кислоты концентрированной и при сильном нагреве выпаривают досуха. Остаток охлаждают и обрабатывают 10 мл хлористоводородной кислоты разведенной (1:1) и упаривают до «влажных солей». Остаток доводят хлористоводородной кислоты раствором 2,5 % до объёма 10 мл.

Метод 1б («сухая» минерализация, свинец, кадмий)

Помещают 0,5-1,0 г (точная навеска) испытуемого образца в тигель (из стеклоуглерода марки С-200, разрешается использование кварцевых и платиновых тиглей, фарфоровых с неповрежденной внутренней поверхностью), смачивают 0,5-1,5 мл серной кислоты концентрированной и осторожно нагревают на пламени газовой горелки, электрической плитке и т.п. до полного обугливания. Тигель охлаждают до комнатной температуры и прибавляют 1 мл азотной кислоты концентрированной и 0,25 мл серной кислоты концентрированной. Осторожно нагревают на электрической плитке до исчезновения бурых паров, избегая разбрызгивания и усиливают нагрев до исчезновения плотных белых паров. Тигель помещают в муфельную печь и прокаливают при температуре около 500 °С до получения зольного остатка. Охлаждают до комнатной температуры и прибавляют 4 мл хлористоводородной кислоты раствора 6 М, закрывают крышкой и нагревают на водяной бане 15 мин. Крышку снимают и упаривают содержимое тигля до «влажных солей», прибавляют 0,05 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и 5 мл горячей воды и нагревают в течение 2 мин. Полученный остаток количественно (трехкратно) переносят небольшими порциями при помощи воды для хроматографии в мерную колбу вместимостью 25 или 50 мл, фильтруя через беззольный фильтр, промытый хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, и доводят объём раствора водой для хроматографии до метки.

Метод 2a («мокрая» минерализация, свинец, кадмий)

Помещают 1,0 г (точная навеска) испытуемого образца в колбу Кьельдаля вместимостью 100 мл, прибавляют 7 мл азотной кислоты концентрированной, перемешивают до полного смачивания пробы. К содержимому прибавляют 4 мл хлорной кислоты концентрированной и перемешивают. Колбу закрепляют под углом 45° на песчаной бане, осторожно нагревают до появления бурых паров азота оксида и нагрев отключают. После полного прекращения выделения бурых паров температуру повышают до появления плотных белых паров и получения кислотного остатка 1-2 мл. Колбу снимают с песчаной бани, охлаждают и количественно при помощи воды для хроматографии переносят ее содержимое в мерную колбу вместимостью 50 или 100 мл, фильтруя содержимое через беззольный фильтр, промытый хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, доводят объём раствора водой до метки.

Метод 2б («мокрая» минерализация, ртуть)

Помещают 0,5 г (точная навеска) испытуемого образца в стеклянный стакан вместимостью 50 мл, смачивают водой, приливают 6 мл серной кислоты концентрированной и 3 мл азотной кислоты концентрированной. Перемешивают, стакан накрывают крышкой из стеклоуглерода и оставляют в водяной бане на 1 сут при температуре около 10-20 °C. Нагреваютна водяной бане  при температуре 50-60 °С в течение 2 ч, охлаждают до комнатной температуры, снимают крышки из стеклоуглерода и прибавляют 5 мл аммония персульфата раствора 5 %. Смесь перемешивают и оставляют в стакане на ночь при комнатной температуре. На следующий день содержимое стакана переносят в мерную колбу вместимостью 200 или 250 мл и проводят дальнейшее определение.

Метод 2в («мокрая» минерализация, ртуть)

Помещают 1 г (точная навеска) испытуемого образца во фторопластовый стакан металлического тубуса, смачивают 6 мл смеси серной кислоты концентрированной и азотной кислоты концентрированной 1:5. Стакан, закрытый фторопластовой крышкой, помещают в металлический тубус. Металлический тубус закрывают, помещают в сушильный шкаф, нагревают до 100 °С и выдерживают при этой температуре в течение 4 ч, далее после охлаждения переносят содержимое фторопластового стакана в мерную колбу вместимостью 200 или 250 мл, и проводят определение.

Метод 2г («мокрая» минерализация, свинец, кадмий, мышьяк)

Помещают 1,0 г (точная навеска) испытуемого образца помещают во фторопластовый стакан для автоклава, смачивают 10 мл смеси хлористоводородной кислоты концентрированной и азотной кислоты концентрированной в соотношении 1:1. Стакан, закрытый фторопластовой крышкой, помещают в автоклав, нагревают до 200 °С и выдерживают при этой температуре 2 ч. Вынимают, охлаждают, вскрывают и количественно переносят содержимое фторопластового стакана в мерную колбу вместимостью 50 мл, фильтруя содержимое через беззольный фильтр, промытый хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, доводят объём раствора водой до метки.

Метод 2д («мокрая» минерализация, свинец, кадмий, ртуть, мышьяк)

Мокрую минерализацию проводят в системе микроволнового разложения. Разложение в микроволновой системе возможно в многообразном аппаратурном исполнении при использовании различных кислот и реагентов. При использовании таких систем нужно придерживаться рекомендаций фирмы-изготовителя. Необходимо валидировать методику разложения лекарственного растительного сырья/препаратов.

Пример методики пробоподготовки

Помещают 0,5 г (точная навеска) испытуемого образца в сосуд для микроволнового разложения, приливают 3 мл воды и 5 мл азотной кислоты концентрированной, осторожно перемешивают до полного смачивания и выдерживают в течение 5–10 мин. Сосуд герметично закрывают, помещают в защитный кожух и затем в ротор микроволновой системы. Далее проводят обработку по программе, приведенной в табл. 2.

Таблица 2 – Программа обработки образцов лекарственного растительного сырья/препарата в системе микроволнового разложения

Этап	Время, мин	Температура, °С	Мощность излучения, Вт
1	5	80	до 350
2	3,5	160	до 800
3	4,5	190	до 1000
4	12	190	до 800

В конце цикла сосуды охлаждают на воздухе, открывают и полученный прозрачный или с небольшим осадком раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, фильтруя через беззольный фильтр, промытый хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М, и доводят объём раствора водой до метки.

Проведение измерений. Определения проводят различными вариантами метода атомно-абсорбционной спектрометрии, с разными способами атомизации пробы. Чувствительность измерения в атомно-абсорбционном анализе для пламенного метода составляет 0,01-10 мкг/мл, для непламенных - 0,0001-0,1 мкг/мл. Ртуть определяют методом атомно-абсорбционной спектрометрии с применением техники «холодных паров».

Анализ проб на содержание свинца и кадмия осуществляют: пламенной атомизацией (табл. 3); свинца, кадмия и мышьяка с использованием электротермического атомизатора (табл. 4); ртути – на ртутном анализаторе или с использованием ртутно-гидридной приставки к атомно-абсорбционному спектрометру (пламенный или электротермический вариант); мышьяка - с использованием ртутно-гидридной приставки к атомно-абсорбционному спектрометру в соответствии с условиями анализа элементов (табл. 3).

Таблица 3 - Ориентировочные параметры определения тяжёлых металлов и мышьяка методом атомно-абсорбционной спектрометрии (пламенная атомизация)

Примечание – тип пламени: В – воздух, А – ацетилен в соответствии с требованиями инструкции по эксплуатации прибора.

Обработку полученного аналитического сигнала для ртути и мышьяка осуществляют по высоте пика.

Стадия высушивания зависит от кислотного, органического, минерального состава пробы и конструктивных особенностей прибора.

Обработку полученного аналитического сигнала для кадмия, свинца и мышьяка осуществляют по площади пика.

Параметры определения тяжёлых металлов и мышьяка со стадиями высушивания, озоления (пиролиза), атомизации и отжига (очистки) исследуемых проб отрабатываются для конкретных приборов в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора.

Таблица 4 – Ориентировочные параметры определения тяжёлых металлов и мышьяка методом атомно-абсорбционной спектрометрии (электротермическая атомизация)

Элемент	Длина волны, нм	Ширина щели, нм	Стадия озоления (пиролиза)		Стадия атомизации
			Т,°С	tсек, с	Т,°С	tсек, с	tинт, с
Кадмий	228,8	0,20-0,5	300-600	8-25	1300-1700	3-5	3-5
Свинец	283,3	0,20-0,5	500-800	8-25	1600-2000	3-5	3-5
Ртуть*	253,7	0,20-0,5	-	-	900-1100	3-6	3-6
Мышьяк**	193,7	0,20-0,5	800-1400	8-15	2200-2600	3-5	3-5

Примечание – Т,°С - температура озоления, атомизации; t_сек, с - время озоления, атомизации; t_инт, с - время интегрирования;

 

* при использовании ртутно-гидридной приставки;

**при использовании корректора Зеемана.

Для уменьшения влияния минерального состава лекарственного растительного сырья/препарата на исследуемые элементы используют:

1. Кювету с пластиной (платформой).

2. Модификаторы матрицы.

3. Разбавление анализируемого раствора.

Подготовку атомно-абсорбционного спектрометра к работе осуществляют в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора с учетом особенности измерения низких концентраций элементов.

Результатом измерений является величина атомного поглощения элемента, полученная в абсорбционном режиме с доверительной вероятностью Р=0,95.

Обработку результатов измерений и определение соответствия тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье/препарате допустимым нормам проводят с использованием компьютерных про­грамм. При ручной обработке данных строят график зависимости абсорбции от концентрации. Допускается применять линейную, кусочно-линейную или сглаженную нелинейную аппроксимацию градуировочной функции с коэффициентом корреляции не менее 0,990. В расчетах используют сред­нее арифметическое значение 3 параллельных измерений одной пробы.

Результаты определения содержания тяжёлых металлов и мышьяка в испытуемом образце (С) следует считать как среднее арифметическое 3 параллельных определений с точностью до 0,001 мкг.

Содержание тяжелого металла и мышьяка в испытуемом образце в мкг/г (Х) вычисляют по формуле:

где	СХ	-	концентрация металла в испытуемом растворе, мкг/мл;
	V	-	разведение, мл;
	СК	–	концентрация металла в контрольном опыте, мкг/мл;
	VК	–	объём контрольной пробы, мл;
	а	–	навеска испытуемого образца, г.

Альтернативные способы пробоподготовки и
проведения результатов измерений

При проведении определения содержания тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье/препаратах методами атомно-абсорбционной спектрометрии; атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой; масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой могут быть использованы способы пробоподготовки и проведения результатов измерений, приведенные ниже.

Метод 1 (сухая минерализация)

Метод соответствует методу 1б («сухая» минерализация, свинец, кадмий), приведенному в подразделе «Подготовка проб к анализу» для атомно-абсорбционной спектрометрии.

Метод 2 (мокрая минерализация)

Метод соответствует методу 2д («мокрая» минерализация, свинец, кадмий, ртуть, мышьяк), приведенному в подразделе «Подготовка проб к анализу» для атомно-абсорбционной спектрометрии.

Проведение измерений. Определение содержания кадмия, ртути, мышьяка, свинца проводят методом калибровочной кривой. Для этого из стандартных образцов элементов с концентрацией 0,1-1 г/дм³ готовят серию градуировочных растворов, содержащих заявленные элементы в таких концентрациях, чтобы ожидаемое значение концентраций элементов в испытуемом растворе находилось внутри диапазона концентраций градуировочных растворов.

Приготовление градуировочных растворов. Для приготовления градуировочных растворов используют готовые растворы стандартных образцов (ГСО) состава ионов металлов отечественного или зарубежного производства (CRM) c концентрацией элементов 0,1-1 г/дм³ в азотной или хлористоводородной кислоте с массовой долей кислоты не менее 1 %.

Измерения для каждого градуировочного раствора выполняют не менее 5 раз. С помощью программы обработки данных, полученные результаты для каждого градуировочного раствора усредняют, и строят линейную градуировочную характеристику (калибровочную кривую) зависимости выходного сигнала от концентрации определяемых элементов в градуировочном растворе (мг/дм³).

Градуировочная характеристика должна быть линейной во всем диапазоне измеряемых концентраций с коэффициентом корреляции не менее 0,990, который определяется автоматически, без вмешательства оператора.

По значению выходного сигнала испытуемого раствора с использованием градуировочной характеристики и программы обработки данных находят концентрацию определяемых элементов в анализируемом растворе (мг/дм³).

За результат измерений принимают среднее арифметическое 3 параллельных определений одной пробы.

Примеры количественного определения тяжёлых

металлов и мышьяка

Метод 1

Определение проводят методом атомно-абсорбционная спектрометрии.

Испытуемый раствор 1. Аналитическую пробу испытуемого образца измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Помещают 0,5 г (точная навеска) измельченного испытуемого образца в коническую колбу с притертой пробкой − сосуд для микроволнового разложения, добавляют 4 мл воды и 6 мл азотной кислоты концентрированной, осторожно перемешивают до полного смачивания и выдерживают в течение 10-15 мин. Сосуд герметично закрывают, помещают в защитный кожух и затем в ротор микроволновой системы и проводят минерализацию по программе, приведенной в табл. 5.

Таблица 5 – Программа минерализации испытуемых образцов

Этап	Время, мин	Температура, °С	Мощность излучения, Вт
1	9	20-80	до 550
2	7	80-160	до 1500
3	10	160-200	до 1800
4	14	200	до 1500

В конце цикла сосуд охлаждают на воздухе, осторожно открывают и полученный прозрачный или с небольшим осадком раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, фильтруя через фильтр беззольный, промытый хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М и доводят объём раствора водой до метки.

Одновременно готовят контрольный раствор 1, проводя те же стадии обработки с добавлением тех же количеств реагентов, но без испытуемого образца.

Испытуемый раствор 2. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5,0 мл испытуемого раствора 1, доводят объём раствора водой до метки и тщательно перемешивают. Одновременно готовят контрольный раствор 2, проводя те же стадии обработки с добавлением тех же количеств реагентов, но без испытуемого раствора 1.

Определение мышьяка и ртути проводят, используя испытуемый раствор 1 и контрольный раствор 1, определение свинца и кадмия – используя испытуемый раствор 2 и контрольный раствор 2.

1. Приготовление калибровочных растворов ионов свинца

Исходный раствор ионов свинца 1,0 мкг/мл. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 мл ГСО 7778-2000 состава раствора ионов свинца, прибавляют 1,0 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают (раствор А). Раствор А хранят в плотно закрытой пластиковой посуде при температуре 4-8 °С не более 1 мес.

Калибровочные растворы ионов свинца с концентрациями 0,01 мкг/мл; 0,02 мкг/мл; 0,04 мкг/мл. В мерные колбы вместимостью 100 мл помещают 1,0; 2,0; 4,0 мл раствора А, прибавляют 1 мл азотной кислоты концентрированной и доводят объём раствора водой до метки. Получают калибровочные растворы с концентрацией ионов свинца 0,01 мкг/мл; 0,02 мкг/мл; 0,04 мкг/мл соответственно. Растворы готовят перед началом измерений и используют в течение 1 сут.

Возможно приготовление калибровочных растворов с использованием автосемплера оборудования.

2. Приготовление калибровочных растворов ионов кадмия

Исходный раствор ионов кадмия 1,0 мкг/мл. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 мл ГСО 7773-2000 состава раствора ионов кадмия, прибавляют 1,0 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают (раствор А). Раствор А хранят в плотно закрытой пластиковой посуде при температуре 4-8  °С не более 1  мес.

Калибровочные растворы ионов кадмия с концентрациями 0,001 мкг/мл; 0,002 мкг/мл; 0,003 мкг/мл. В мерные колбы вместимостью 100 мл помещают 0,1; 0,2; 0,3 мл раствора А, прибавляют 1,0 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой до метки. Получают калибровочные растворы с концентрацией ионов кадмия 0,001 мкг/мл; 0,002 мкг/мл; 0,003 мкг/мл соответственно. Растворы готовят перед началом измерений и используют в течение 1 сут.

Возможно приготовление калибровочных растворов с использованием автосемплера оборудования.

3. Приготовление калибровочных растворов ионов мышьяка

Исходный раствор ионов мышьяка 1,0 мкг/мл. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл ГСО 7344-96 состава раствора ионов мышьяка (III), прибавляют 1,0 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают (раствор А). Раствор А хранят в плотно закрытой пластиковой посуде при температуре 4-8°С не более 1 мес.

Калибровочные растворы ионов мышьяка с концентрациями 0,004 мкг/мл; 0,006 мкг/мл; 0,008 мкг/мл. В мерные колбы вместимостью 100 мл помещают 0,4; 0,6; 0,8 мл раствора А, прибавляют 1,0 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой до метки. Получают калибровочные растворы с концентрацией ионов мышьяка 0,004 мкг/мл; 0,006 мкг/мл; 0,008 мкг/мл соответственно. Растворы готовят перед началом измерений и используют в течение 1 сут.

Возможно приготовление калибровочных растворов с использованием автосемплера оборудования.

4. Калибровочные растворы ионов ртути (для проведения анализа по определению ртути на атомно-абсорбционном спектрометре с гидридной приставкой)

Исходный раствор ионов ртути 0,1 мкг/мл. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 мл ГСО 7343-96 состава раствора ионов ртути (II), прибавляют 4,0 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают (раствор А). Раствор А хранят в плотно закрытой пластиковой посуде при температуре 4-8 °С не более 1 мес.

В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10,0 мл раствора А, прибавляют 4,0 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают (раствор Б). Раствор Б хранят в плотно закрытой пластиковой посуде при температуре 4-8 °С не более 1 мес.

Калибровочные растворы ионов ртути с концентрациями 0,0005; 0,001; 0,0015 мкг/мл. В мерные колбы вместимостью 100мл помещают 0,5; 1,0; 1,5 мл раствора Б, прибавляют 1,0 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой до метки. Растворы готовят перед началом измерений и используют в течение 1 сут.

5. Приготовление раствора матричного модификатора с массовой концентрацией палладия 0,5 г/л (для определения свинца, кадмия). В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,5 мл палладиевого матричного модификатора с концентрацией 10 г/л, доводят объём раствора до метки водой и перемешивают. Раствор хранят при температуре не выше 25 °С не более 5 сут.

6. Приготовление раствора матричного модификатора с массовой концентрацией палладия 1,0  г/л (для определения мышьяка). В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл палладиевого матричного модификатора с концентрацией 10 г/л, доводят объём раствора до метки водой и перемешивают. Раствор хранят при температуре не выше 25 °С не более 5 сут.

7. Раствор восстановителя для ртути (для проведения анализа по определению ртути на атомно-абсорбционном спектрометре с гидридной приставкой или гидридном анализаторе). Навеску 10,0 г олова(II) хлорида дигидрата помещают в мерную колбу вместимостью 500 мл, добавляют 25 мл хлористоводородной кислоты концентрированной. Нагревают при помешивании на электрической плитке до полного растворения. Снимают с плитки, охлаждают до комнатной температуры и осторожно добавляют объём раствора водой до метки.

8. Калибровочные растворы ионов ртути (для проведения анализа по определению ртути на анализаторе ртути)

Стандартный раствор ионов ртути 10,0 мкг/мл (раствор А). В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,1 мл ГСО 7343-96 состава раствора ионов ртути (II), прибавляют 0,4 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой до метки. Раствор А хранят в плотно закрытой пластиковой посуде при температуре 4-8 °С не более 2 мес.

Стандартный раствор ионов ртути 1,0 мкг/мл (раствор Б). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл раствора А, прибавляют 2,0 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой до метки. Раствор Б хранят в плотно закрытой пластиковой посуде при температуре 4-8 °С не более 1 мес.

Стандартный раствор ионов ртути 0,1 мкг/мл (раствор В). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл раствора Б, прибавляют 2,0 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой до метки. Раствор В хранят в плотно закрытой пластиковой посуде при температуре 4-8  °С не более 10 сут.

Стандартный раствор ионов ртути 0,01 мкг/мл (раствор Г). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл раствора В, прибавляют 2,0 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой до метки. Раствор В хранят в плотно закрытой пластиковой посуде при температуре 4-8  °С не более 5 сут.

Построение калибровочной зависимости. Калибровочную зависимость строят, используя кварцевые кюветы (табл. 6).

Таблица 6 – Аликвоты соответствующих исходных стандартных растворов ионов ртути

Проведение измерений. Определение содержания свинца, кадмия, мышьяка проводят на атомно-абсорбционном спектрометре с электротермическим атомизатором (табл.7–10).

Определение содержания ртути проводят на атомно-абсорбционном спектрометре с гидридной приставкой (с поглотительной ячейкой для определения ртути) и лампой с полым катодом ртути, на гидридном анализаторе или на пиролитическом анализаторе ртути (допускается для определения содержания ртути в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах использовать пиролитические анализаторы ртути (прямое определение ртути в пробах без предварительной подготовки), либо анализаторы с пиролитической приставкой).

Таблица 7 – Условия проведения анализа на атомно-абсорбционном спектрометре

№	Параметр	Значение для свинца	Значение для кадмия	Значение для ртути	Значение для мышьяка
1	Длина волны, нм	283,3	228,8	253,7	193,7
2	Ширина щели, нм	0,5	0,5	0,5R	0,5R
3	Тип интегрирования	по площади пика	по площади пика	интегральный	по площади пика
4	Ток лампы, мА	10,0	4,0	3,0	11,0
5	Система коррекции фона (на эффекте Зеемана)	вкл.	вкл.	-	вкл.
6	Тип калибровочной зависимости	линейная	линейная	линейная	линейная
7	Объём пробы испытуемого раствора, мкл	20	10	-	30 (за 2 раза)
8	Объём дозирования модификатора, мкл	10	10	-	10 (за 2 раза)
9	Тип графитовой печи	c пиропокрытием	c пиропокрытием	-	c пиропокрытием и платформой
10	Режим дозирования в предварительно подогретую кювету	вкл. (70 °С)	вкл. (70 °С)	-	вкл. (85 °С)

Таблица 8 – Температурная программа нагрева графитовой печи для определения свинца

Стадия	Температура, °С	Время, сек	Расход аргона, дм3/мин	Запись сигнала
1	85	20,0	0,3	Выкл.
2	95	15,0	0,3	Выкл.
3	120	15,0	0,3	Выкл.
4	1100	10,0	0,3	Выкл.
5	1100	8,0	0,3	Выкл.
6	1100	2,1	0,0	Выкл.
7	2400	1,0	0,0	Вкл.
8	2400	2,0	0,0	Вкл.
9	2400	2,0	0,3	Выкл.

Таблица 9 – Температурная программа нагрева графитовой печи для определения кадмия

Стадия	Температура, °С	Время, сек	Расход аргона, дм3/мин	Запись сигнала
1	85	10,0	0,3	Выкл.
2	95	5,0	0,3	Выкл.
3	120	20,0	0,3	Выкл.
4	500	10,0	0,3	Выкл.
5	500	8,0	0,3	Выкл.
6	500	2,0	0,0	Выкл.
7	2000	0,8	0,0	Вкл.
8	2000	2,0	0,0	Вкл.
9	2000	2,0	0,3	Выкл.

Таблица 10 – Температурная программа нагрева графитовой печи для определения мышьяка

Стадия	Температура, °С	Время, сек	Расход аргона, дм3/мин	Запись сигнала
1	110	10,0	0,3	Выкл.
2	140	12,0	0,3	Выкл.
3	160	5,0	0,3	Выкл.
4	1400	10,0	0,3	Выкл.
5	1400	10,0	0,3	Выкл.
6	1400	2,0	0,0	Выкл.
7	2700	0,7	0,0	Вкл.
8	2700	2,0	0,0	Вкл.
9	2700	2,0	0,3	Выкл.

Обработка результатов измерений на атомно-абсорбционном спектрометре. Обработку результатов проводят с использованием компьютерной программы. При ручной обработке данных строят график зависимости абсорбции от концентрации. Измерение содержания определяемых элементов проводят методом калибровочной кривой. Используется линейная аппроксимация градуировочной функции с коэффициентом корреляции не менее 0,98.

Результаты определения содержания элементов в пробе (С) следует считать, как среднее арифметическое 3 параллельных измерений одной пробы.

Содержание элемента в испытуемом образце в мг/кг с помощью программного обеспечения прибора (Х) вычисляют по формуле:

Содержание элемента в испытуемом образце в мг/кг (Х) вычисляют по формуле (1).

Ориентировочные условия проведения анализа для определения ртути на пиролитическом анализаторе ртути. Аналитическую пробу испытуемого образца измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Помещают 0,1 г (точная навеска) измельченного испытуемого образца в кювету из никелевого сплава и отправляют на анализ по усредненной температурно-операционной программе для определения ртути (табл. 11).

Таблица 11 – Усредненная температурно-операционная программа для определения ртути в кюветах из никелевого сплава

Обработка результатов измерений на пиролитическом анализаторе ртути. Обработку результатов измерений проводят с использованием компьютерной программы. Используется линейная аппроксимация градуировочной зависимости с коэффициентом корреляции не менее 0,98.

Результаты определения содержания ртути в пробе (С) следует считать, как среднее арифметическое 3 параллельных измерений одной пробы.

Содержание элемента в испытуемом образце в мг/кг с помощью программного обеспечения прибора.

Содержание ртути в испытуемом образце в мг/кг (Х) вычисляют по формуле:

Метод 2

Определение проводят методом атомно-эмиссионная спектрометрия с индуктивно-связанной плазмой

Растворитель. В мерную колбу вместимостью 1000  мл помещают 3  мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой деионизованной до метки.

Испытуемый раствор 1 (определение содержания мышьяка, кадмия и свинца). Аналитическую пробу испытуемого образца измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Помещают 1,0 г (точная навеска) измельченного испытуемого образца, высушенного до постоянной массы при 105 °С в течение 2 ч, в сосуд для микроволнового разложения, добавляют 10 мл азотной кислоты концентрированной, осторожно перемешивают до полного смачивания и помещают в микроволновую печь. В случае необходимости к испытуемому образцу добавляют 1-2 мл водорода пероксида с соответствующим уменьшением объёма азотной кислоты (суммарный объём раствора должен составлять 10 мл). Проводят разложение при 165-175 °С (в зависимости от конфигурации микроволновой системы) в течение 30 мин и проводят минерализацию по программе, приведенной в таблице 12.

Таблица 12 – Программа минерализации испытуемых образцов

Этап	Время, мин	Температура, °С	Мощность излучения, Вт
1	3	20-80	до 550
2	5	80	до 550
3	10-15	80-175*	до 1500
4	30	175*	до 1800

^*допускается снижение температуры до 165 °С в зависимости от конфигурации микроволновой системы.

Полученные после микроволнового разложения растворы охлаждают до комнатной температуры, фильтруют через фильтр беззольный в мерные колбы объёмом 25 мл, доводят объём раствора водой деионизованной до метки.

Испытуемый раствор 2 (определение содержания ртути). В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5,0 мл испытуемого раствора 1, доводят объём раствора растворителем до метки.

Калибровочные растворы ионов свинца, кадмия и мышьяка

Исходный раствор ионов свинца, кадмия и мышьяка (свинца – 5,0 мг/л, кадмия – 1,0 мг/л, мышьяка – 0,5 мг/л). В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 1,25 мл стандартного раствора ионов свинца 1000 мг/л, 0,25 мл стандартного раствора ионов кадмия 1000 мг/л и 1,25 мл стандартного раствора ионов мышьяка 100 мг/л, прибавляют 1,0 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой деионизованной до метки.

Калибровочный раствор 1 (ионов свинца – 0,10 мкг/мл, ионов кадмия – 0,02 мкг/мл, ионов мышьяка – 0,01 мкг/мл). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл исходного раствора ионов свинца, кадмия и мышьяка, доводят объём раствора растворителем до метки.

Калибровочный раствор 2 (ионов свинца – 0,20 мкг/мл, ионов кадмия – 0,04 мкг/мл, ионов мышьяка – 0,02 мкг/мл). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,0 мл исходного раствора ионов свинца, кадмия и мышьяка, доводят объём раствора растворителем до метки.

Калибровочный раствор 3 (ионов свинца – 0,30 мкг/мл, ионов кадмия – 0,06 мкг/мл, ионов мышьяка – 0,03 мкг/мл). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 3,0 мл исходного раствора ионов свинца, кадмия и мышьяка, доводят растворителем объём раствора и перемешивают.

Контрольный раствор. В качестве контрольного раствора используют растворитель.

Проведение измерений. Определение содержания свинца, кадмия, мышьяка проводят на атомно-эмиссионном спектрометре с индуктивно-связанной плазмой.

Определение содержания определяемых элементов проводят методом калибровочной кривой или методом добавок. Характеристические длины волн эмиссии (λ) по выбранным элементам представлены в табл. 13. В случае мышьяка и кадмия за результат можно принимать среднее значение концентраций, полученных по результатам определения на двух длинах волн.

Таблица 13 – Характеристические длины волн

Параметры проведения испытания на атомно-эмиссионном спектрометре с индуктивно-связанной приведены в табл. 14.

Таблица 14 – Условия проведения анализа на атомно-эмиссионном спектрометре

№	Параметр	Значение
1	Мощность плазмы	1500 Вт
2	Расход плазмообразующего газа	15 л/мин
3	Расход распылительного газа	0,6 л/мин
4	Расход вспомогательного газа	0,2 л/мин
5	Скорость потока образца	1,5 л/мин
6	Количество повторных анализов	5
7	Направление регистрации сигналов	Аксиальное
8	Время интегрирования	Авто

Определение содержание ртути проводят с помощью гидридного анализатора или гидридной приставки к атомному абсорберу по методике, описанной в разделе «Атомно-абсорбционная спектрометрия».

Обработка результатов измерений на атомно-эмиссионном спектрометре. Результаты определения содержания элементов в испытуемом растворе следует считать, как среднее арифметическое 3 параллельных измерений одной пробы.

Содержание элемента в испытуемом образце в мг/кг (Х) вычисляют по формуле (1).

Метод 3

Определение проводят методом масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой

Испытуемый раствор для определения содержания свинца, кадмия, ртути и мышьяка в лекарственном растительном сырье/препаратах готовится по методике приготовления испытуемого раствора 1, описанной в разделе «Атомно-эмиссионная спектрометрия с индуктивно-связанной плазмой».

Растворитель. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 32 мл азотной кислоты концентрированной, доводят объём раствора водой деионизованной до метки.

Калибровочные растворы ионов свинца, кадмия, ртути и мышьяка

Исходный раствор ионов ртути 10,0 мг/л. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл стандартного раствора ионов ртути 1000 мг/л, доводят объём раствора растворителем до метки.

Исходный раствор ионов свинца, кадмия, ртути и мышьяка (свинца –5,0 мкг/мл, кадмия – 1,0 мкг/мл, ртути – 0,1 мкг/мл, мышьяка – 0,5 мкг/мл). В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 1,25 мл стандартного раствора ионов свинца 1000 мг/л, 0,25 мл стандартного раствора ионов кадмия 1000 мг/л, 2,5 мл исходного раствора ртути 10,0 мг/л и 1,25 мл стандартного раствора ионов мышьяка 100 мг/л, доводят объём раствора растворителем до метки.

Калибровочный раствор1 (ионов свинца – 0,10 мкг/мл, ионов кадмия – 0,02 мкг/мл, ионов ртути – 0,002 мкг/мл, ионов мышьяка – 0,01 мкг/мл). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл исходного раствора ионов свинца, кадмия, ртути и мышьяка, доводят объём раствора растворителем до метки.

Калибровочный раствор 2 (ионов свинца – 0,20 мкг/мл, ионов кадмия – 0,04 мкг/мл, ионов ртути – 0,004 мкг/мл, ионов мышьяка – 0,02 мкг/мл). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,0 мл исходного раствора ионов свинца, кадмия, ртути и мышьяка, доводят объём раствора растворителем до метки.

Калибровочный раствор 3 (ионов свинца – 0,30 мкг/мл, ионов кадмия – 0,06 мкг/мл, ионов ртути – 0,006 мкг/мл, ионов мышьяка – 0,03 мкг/мл). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 3,0 мл исходного раствора ионов свинца, кадмия, ртути и мышьяка, доводят объём раствора растворителем до метки.

Контрольный раствор. В качестве контрольного раствора используют растворитель.

Проведение измерений. Определение содержания свинца, кадмия, ртути и мышьяка проводят на масс-спектрометре с индуктивно-связанной плазмой.

Определение содержания определяемых элементов проводят методом калибровочной кривой или методом добавок. Для анализа используют изотопы, приведенные в табл. 15.

Таблица 15 – Изотопы используемые для на масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой

№	Изотоп	Мышьяк	Кадмий	Ртуть	Свинец
1	Основные	75	111	202	208
2	Вспомогательные	-	114, 106, 108	-	206, 207

Параметры проведения испытания на масс-спектрометре с индуктивно-связанной плазмой приведены в табл. 16.

Таблица 16 – Условия проведения анализа на масс-спектрометре

№	Параметр	Значение
1	Мощность плазмы	1500 Вт
2	Расход плазмообразующего газа	15 л/мин
3	Расход распылительного газа	1,0 л/мин
4	Скорость потока образца	0,10 об/мин
5	Количество повторных анализов	5
6	Время интегрирования	0,1 с

Обработка результатов измерений на масс-спектрометре. Результаты определения содержания элементов в испытуемом растворе следует считать, как среднее арифметическое 3 параллельных измерений одной пробы.

Содержание элемента в испытуемом образце в мг/кг (Х) вычисляют по формуле (1).