Мед натуральный, раствор для подкожного введения

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 

 

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Мед натуральный,  раствор для подкожного введения	ФС.3.4.0030.22
Mel naturale solutio pro injectione subcutanea	Вводится впервые

 

Настоящая фармакопейная статья распространяется на лекарственный препарата Мед натуральный, раствор для подкожного введения. Препарат должен соответствовать требованиям ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения» и нижеприведённым требованиям.

Содержит не менее 78,0 % и не более 122,0 % суммы глюкозы и фруктозы от заявленного количества.

Описание. Прозрачная, бесцветная или слабо окрашенная жидкость.

Подлинность

Высокоэффективная жидкостная хроматография. Времена удерживания основных пиков на хроматограмме испытуемого раствора, полученной для количественного определения, должны соответствовать временам удерживания основных пиков на хроматограмме раствора СО глюкозы и фруктозы.

Биологический тест. Препарат считается активным, если продолжительность «тиопенталового сна» в опытной группе мышей сокращается не менее чем на 15 % по сравнению с продолжительностью сна в контрольной группе мышей.

Приготовление растворов

Раствор тиопентала натрия 0,2 %. 0,02 г тиопентала натрия растворяют в 10,0 мл 0,9 % раствора натрия хлорида.

Раствор используют свежеприготовленным.

Испытания проводят на здоровых белых беспородных мышах одного пола, массой тела 19-21 г, которые ранее не использовались в экспериментах. За 2 ч до взвешивания и отбора животных для проведения испытания у них отбирают корм и воду. Мышей взвешивают и делят на опытную и контрольную группы, по 10 особей в каждой.

Опытной группе мышей вводят внутривенно 0,2 мл испытуемого препарата на мышь; контрольной группе вводят внутривенно 0,2 мл 0,9 % раствора натрия хлорида на мышь. Через 2 мин после инъекции всем мышам обеих групп вводят внутривенно по 0,5 мл 0,2 % раствора тиопентала натрия. Практически сразу после введения тиопентала натрия животные принимают боковое положение и засыпают. Длительность сна регистрируют в мин для каждой особи индивидуально, полученные величины усредняют для каждой группы.

Биологическую активность препарата в процентах (А) вычисляют по формуле:

A

где:	A	–	разница «тиопенталового сна» в контрольной и опытной группах, %;
	B	–	средняя продолжительность «тиопенталового сна» мышей в контрольной группе,  мин;
		–	средняя продолжительность «тиопенталового сна» мышей в опытной группе, мин.

Прозрачность раствора. Препарат должен выдерживать сравнение с эталоном I. В соответствии с требованиями ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей».

Цветность раствора. Препарат должен  быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном Y₆ или BY₆. В соответствии с требованиями ОФС «Степень окраски жидкостей».

pH. От 4,5 до 6,5. В соответствии с требованиями ОФС «Ионометрия» (метод 3).

Механические включения

Видимые. В соответствии с ОФС «Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах».

Невидимые. В соответствии с ОФС «Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения».

Родственные примеси

5-гидроксиметилфурфурол. Определение проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Приготовление растворов

Подвижная фаза (ПФ). Вода – ацетонитрил (80 : 20).

Срок годности раствора не более 1 мес при хранении в защищенном от света месте.

Раствор стандартного образца (СО) 5-гидроксиметилфурфурол. Около 25 мг (точная навеска) СО 5-гидроксиметилфурфурола (CAS 67-47-0) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 25 мл воды, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают (0,5 мг/мл). 1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 25 мл воды, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают (0,005 мг/мл). 5,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 20 мл воды, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают (0,0005 мг/мл).

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. 1,0 мл раствора СО 5-гидроксиметилфурфурола помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой метки и перемешивают (0,000005 мг/мл).

 

Условия хроматографирования

Колонка		250 мм × 4,6 мм, силикагель октилсилильный для хроматографии, 5мкм
Температура колонки, °С		25
Скорость потока, мл/мин		1,0
Детектор Длина волны, нм		спектрофотометрический 283
Режим хроматографирования	изократический
Объем вводимой пробы, мкл		20
Время хроматографирования, мин		10

 

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор СО 5-гидроксиметилфурфурола и испытуемый препарат.

Время удерживания пика 5-гидроксиметилфурфурола – около 4,5 мин.

Проверка пригодности хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

на хроматограмме раствора СО 5-гидроксиметилфурфурола

- фактор асимметрии пика (A_S) пика 5-гидроксиметилфурфурола должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение (RSD) площади пика 5-гидроксиметилфурфурола должно быть не более 2,0 % (6 введений);

- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику 5-гидроксиметилфурфурола должна быть не менее 1000 теоретических тарелок;

- отношение сигнал/шум (S/N) для пика 5-гидроксиметилфурфурола должно быть не менее 10.

 

Содержание 5-гидроксиметилфурфурола в препарате в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где:   S        - площадь пика 5-гидроксиметилфурфурола на хроматограмме испытуемого препарата;

         S_о      – площадь пика 5-гидроксиметилфурфурола на хроматограмме раствора СО 5-гидроксиметилфурфурола;

         а_о      - навеска СО 5-гидроксиметилфурфурола, г;

         Р       – содержание основного вещества в СО 5-гидроксиметилфурфурола, %;

         W       – содержание воды.

 

Допустимое содержание примесей:

- 5-гидроксиметилфурфурола не более 0,5 ppm.

 

Спирт этиловый. Не более 180 ppm. Определение проводят методом газовой хроматографии.

Приготовление растворов

Испытуемый  раствор. 20,0 мл препарата и 1,0 мл раствора внутреннего стандарта помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 10 мл воды, доводят объём раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. 

Раствор внутреннего стандарта. Около 360,0 мг (точная навеска) стандартного образца (СО) 2-пропанола помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 60  мл воды, доводят объём раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. 

Стандартный раствор. Около 360,0 мг (точная навеска) СО этанола помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50  мл воды, доводят объём раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. 1,0 мл полученного раствора и 1,0 мл раствора внутреннего стандарта  помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 15 мл воды, перемешивают и доводят объём раствора тем же растворителем до метки и еще раз перемешивают. 

Все растворы используют свежеприготовленными.

Хроматографические условия

Колонка		капиллярная 30 м × 0,53 мм, 3 мкм 6%-цианопропилфенил - 94%-диметилполисилоксан
Детектор		пламенно-ионизационный
Газ-носитель		азот
Скорость потока, мл/мин		2
Скорость воздуха, мл/мин		300
Скорость водорода, мл/мин		30
Деление потока		1:10
Объем вводимой пробы, мкл		1
Температура, °C	колонка	60
	инжектор	200
	детектор	220

 

Порядок выхода пиков: этанол, 2-пропанол.

Проверка пригодности хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются для хроматограммы стандартного раствора следующие условия:

- разрешение (R_S) между пиками этанола и 2-пропанола не менее 2,0;

- фактор асимметрии пика (A_S) пиков этанола и 2-пропанола должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение (RSD) площадей пиков этанола к площадям пиков 2-пропанола должно быть не более 10,0 % (6 введений).

- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пикам этанола и 2-пропанола, должна быть не менее 5000 теоретических тарелок.

Хроматографируют испытуемый раствор и стандартный раствор.

Содержание этанола (C₂H₅OH) в препарате в ppm (Х) вычисляют по формуле:

где:   S – отношения площади пика этанола к площади пика 2-пропанола на хроматограмме испытуемого раствора;

         S_о – отношения площади пика этанола к площади пика 2-пропанола на хроматограмме стандартного раствора;

         а_о – навеска СО этанола, г;

         Р – содержание основного вещества в СО этанола, %.

 

Извлекаемый объём. Не менее номинального. В соответствии с требованиями ОФС «Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения».

Пирогенность. Препарат должен быть апирогенным. В соответствии с требованиями ОФС «Пирогенность». Тест-доза – 0,5 мл препарата на 1 кг.

Аномальная токсичность. Препарат должен быть не токсичным. В соответствии с требованиями ОФС «Аномальная токсичность». Тест-доза – 0,5 мл препарата для инъекций на мышь, внутривенно. Срок наблюдения 48 ч.

Стерильность. Препарат должен быть стерильным в соответствии с требованиями ОФС «Стерильность».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Определение проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Приготовление растворов

         Подвижная фаза (ПФ). Ацетонитрил – вода  (75 : 25).

Срок годности раствора не более 1 мес при хранении в защищенном от света месте.

Испытуемый раствор. 2,0 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 5 мл, доводят объем раствора ПФ до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Раствор стандартных образцов (СО) глюкозы и фруктозы. Около 25,0 мг (точная навеска) СО глюкозы и около 25,0 мг (точная навеска) СО фруктозы помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют 20 мл ПФ, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают.

Срок годности раствора не более 1 сут при хранении в прохладном, защищенном от света месте.

 

Условия хроматографирования

Колонка	250 м × 4,6 мм, силикагель аминопропилсилильный для хроматографии, 5 мкм
Температура колонки, °С	25
Скорость потока, мл/мин	1,0
Детектор	рефрактометрический
Режим хроматографирования	изократический
Объем вводимой пробы, мкл	100
Время хроматографирования, мин	15

 

Относительные времена удерживания пиков: фруктозы - 1 (около 9-11 мин), глюкозы - 1,2.

Проверка пригодности хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются для хроматограммы раствора СО глюкозы и фруктозы следующие условия:

- разрешение (R_S) между пиками глюкозы и фруктозы не менее 1,5;

- фактор асимметрии пика (A_S) пиков глюкозы и фруктозы должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение (RSD) площадей пиков глюкозы и фруктозы должно быть не более 2,0 % (6 введений);

- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пикам глюкозы и фруктозы, должна быть не менее 1000 теоретических тарелок.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор СО глюкозы и фруктозы.

Содержание суммы глюкозы и фруктозы в препарате в процентах от заявленного () вычисляют по формуле:

 

где:	S1	–	площадь пика глюкозы на хроматограмме испытуемого раствора;
	S2	–	площадь пика фруктозы на хроматограмме испытуемого раствора;
		–	площадь пика глюкозы на хроматограмме раствора СО глюкозы и фруктозы;
		–	площадь пика фруктозы на хроматограмме раствора СО глюкозы и фруктозы;
	ао1	–	навеска СО глюкозы, г;
	ао2	–	навеска СО фруктозы, г;
	Ргл	–	содержание основного вещества в CO глюкозы, %;
	Рфр		содержание основного вещества в CO фруктозы, %;
	Lгл	–	заявленное количество глюкозы в препарате, г.
	Lфр		заявленное количество фруктозы в препарате, г.

 

Хранение. В соответствие с требованиями ОФС «Хранение лекарственных средств».