Настоящая фармакопейная статья распространяется на аллерген бруцеллезный жидкий, раствор для внутрикожного введения (Бруцеллин), представляющий собой полисахаридно-белковый комплекс, полученный из вакцинного штамма Brucella abortus 19 ВА в процессе химической обработки в 0,9% растворе натрия хлорида для инъекций. В ампуле содержится 10 внутрикожных доз, одна внутрикожная доза (0,1 мл) содержит от 3,8 до 5,4 мкг белка. Аллерген бруцеллезный жидкий не содержит консервантов и антибиотиков.

Препарат предназначен для специфической диагностики повышенной чувствительности к бруцеллам.

Производство

Технология производства аллергена бруцеллезного жидкого предусматривает получение производственных посевных культур штамма B. abortus 19 BА I, II, III и IV генераций; процесс накопления биомассы для приготовления микробной взвеси с необходимой концентрацией; инактивацию IV генерации микробной массы бруцелл ацетоном; осаждение и высушивание микробной массы; получение гидролизата из микробной массы, выделение из гидролизата действующего вещества - полисахаридно-белкового комплекса; очистку и лиофилизацию полуфабриката; приготовление раствора аллергена из лиофилизированного полуфабриката путем добавления 0,9% раствора натрия хлорида до содержания белка  мкг/мл, стерилизацию в водяной бане при температуре ; розлив, герметизацию и маркировку ампул с препаратом.

На стадиях приготовления посевных культур проводят контроль на отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов и на отсутствие диссоциации пробой с трипафлавином (отсутствие агглютинации); определяют концентрацию микробных клеток; проводят контроль специфической стерильности инактивированной бактериальной массы бруцелл; на этапе приготовления аллергена определяют белок, рН, стерильность.

Вакцинный штамм B. abortus 19 BА биовар I должен иметь типичные культуральные, морфологические, биохимические и серологические свойства; не должен содержать бруцеллезного бактериофага; остаточная вирулентность для белых мышей массой 18-20 г должна находиться в пределах инфицирующих доз  от  до  микробных клеток (м.к.); не должен вызывать гибель белых мышей массой 18-20 г при подкожном введении дозы  м.к. в течение 6 сут наблюдения; при подкожном введении морским свинкам дозы  м.к./мл через 14 сут должен определяться от  до  м.к./мл в 1 мл суспензии селезенки; должен предохранять от инфицирования вирулентным штаммом B. melitensis 565 не менее 8 из 10 морских свинок, иммунизированных подкожно  живых м.к./мл.

Перед приготовлением очередной серии производственной культуры вакцинного штамма B. abortus 19 BА проводят пассаж штамма через организм морской свинки с последующим отбором типичных колоний, выросших на плотной питательной среде из посевов селезенки или регионарных лимфатических узлов.

Работу с культурой штамма B. abortus 19 BА проводят с соблюдением санитарных правил "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней", с культурой вирулентного штамма B. melitensis 565 - санитарные правила "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)", действующих в РФ.

Испытания

Описание. Прозрачная бесцветная или светло-желтого цвета жидкость. Определение проводят визуально.

Подлинность. Должны наблюдаться гиперемия и инфильтрат (отек) размером не менее 8 мм вокруг места при внутрикожном введении 0,1 мл аллергена морской свинке. Определение проводят биологическим методом в соответствии с разделом "Специфическая активность".

Прозрачность. Прозрачный раствор (определение проводят в соответствии с ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей") или раствор с оптической плотностью не более 0,05 (определение проводят в соответствии с ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях" в кюветах с толщиной слоя 3 мм при длине волны 540 нм). Метод определения указывают в нормативной документации.

Механические включения. Должны соответствовать требованиям ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах".

pH. От 6,8 до 7,2. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия".

Извлекаемый объем. Должен быть не менее номинального (не менее 1,0 мл). Испытание проводят в соответствии с ОФС "Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения".

Белок. От 38 до 54 мкг/мл. Определение проводят колориметрическим методом в соответствии с ОФС "Определение белка колориметрическим методом (метод Лоури) в биологических лекарственных препаратах" без предварительного осаждения белка.

Стерильность. Препарат должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС "Стерильность" методом, указанным в нормативной документации.

Специфическая стерильность. Препарат не должен содержать живых бруцелл. Специфическую стерильность проверяют высевом по 0,1 мл аллергена на чашки Петри с печеночным или картофельным агаром и на 2 пробирки с печеночным бульоном. Учет результатов проводят через 6 сут выдерживания посевов при температуре . Посевы должны быть стерильными.

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным. Определение проводят в соответствии с ОФС "Аномальная токсичность". Испытания проводят путем внутрибрюшинного введения по 0,1 мл 5 белым мышам массой 18-20 г и подкожного введения по 0,1 мл одной морской свинке массой 250-300 г, если нет других указаний в нормативной документации. Период наблюдения за животными составляет 7 сут.

Специфическая активность. Препарат должен вызывать на месте введения реакцию в виде гиперемии и инфильтрата (отека) размером от 8 до 14 мм при внутрикожном введении 0,1 мл аллергена иммунизированным морским свинкам.

Двух морских свинок массой 325-375 г иммунизируют подкожно вакциной бруцеллезной живой в дозе  м.к./мл шприцем вместимостью 2 мл. Через 30-40 сут иммунизированным и одной контрольной (неиммунизированной) морской свинке в центр депилированного участка кожи размером 4х4 см на боковой поверхности туловища, предварительно обработанной спиртом, строго внутрикожно вводят 0,1 мл аллергена.

Учет проводят через 48 ч по реакции в виде гиперемии и инфильтрата (отека) вокруг места введения аллергена. Положительной считают реакцию в виде гиперемии и инфильтрата не менее 8 мм. Отрицательной реакцией считают отсутствие кожных проявлений или наличие гиперемии и инфильтрата менее 8 мм.

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Лекарственные формы" и ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств".

Транспортирование и хранение. При температуре от 2 до 8°С в условиях, исключающих замораживание препарата в соответствии с ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств".