Тимьяна обыкновенного трава	ФС.2.5.0097.18
Thymi vulgaris herba	ГФ XI, вып. 2 ст. 61

 

Собранная в фазу цветения, высушенная и обмолоченная трава культивируемого полукустарника тимьяна обыкновенного - Thymus vulgaris L., сем. яснотковых - Lamiaceae.

 

Подлинность

 

Внешние признаки. Цельное сырье. Смесь цельных или частично измельченных листьев, цветков и кусочков стеблей толщиной до 1 мм. Листья мелкие, короткочерешковые, цельнокрайние, продолговато-обратнояйцевидной или продолговато-ланцетовидной формы с завернутым вниз краем; длина 5-10 мм, ширина 2-5 мм. Под лупой (10х) на обеих поверхностях листа видны многочисленные круглые, блестящие, красновато-коричневые железки с эфирным маслом.

Цветки мелкие, одиночные или по нескольку вместе. Чашечка двугубая, пятизубчатая, венчик двугубый. Кусочки стеблей различной длины, толщиной до 1 мм, слегка четырехгранные.

Цвет листьев сверху темно-зеленый или коричневато-зеленый, снизу - серовато-зеленый; чашечки - светло-зеленый, иногда у основания верхней губы фиолетовый; венчика - розовый, светло-лиловый или беловатый, стеблей - от зеленовато-коричневого до коричневого с сероватым оттенком. Запах сильный характерный. Вкус водного извлечения горьковато-пряный, слегка жгучий.

Измельченное сырье. Смесь кусочков листьев, цветков и стеблей, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм.

При рассмотрении под лупой (10х) или стереомикроскопом (16х) видны кусочки стеблей слегка четырехгранные, тонкие от зеленовато-коричневого цвета до коричневого с сероватым оттенком. Листья сверху темно-зеленого или коричневато-зеленого цвета, снизу серовато-зеленого, цельные с завернутым вниз краем и в виде кусочков различной формы; на обеих поверхностях листа видны многочисленные круглые, блестящие, красновато-коричневые железки с эфирным маслом. Цветки мелкие, одиночные или по нескольку вместе с двугубым венчиком розоватого, светло-лилового или беловатого цвета и двугубой светло-зеленой, иногда у основания верхней губы фиолетовой чашечкой, часто измельчены.

Цвет измельченного сырья зеленый, серовато-зеленый с зеленовато-фиолетовыми, розовато-коричневыми, светло-лиловыми или беловатыми вкраплениями. Запах сильный характерный. Вкус водного извлечения горьковато-пряный, слегка жгучий.

Микроскопические признаки. Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепарата листа с поверхности должны быть видны клетки эпидермиса верхней и нижней сторон листа с извилистыми стенками; на верхнем эпидермисе иногда заметна складчатость кутикулы и четковидное утолщение стенок. Устьица имеются на обеих поверхностях листа и сопровождаются двумя околоустьичными клетками, расположенными перпендикулярно устьичной щели (диацитный тип). Эфиромасличные железки круглые, состоят из 8 выделительных клеток, расположенных радиально. Волоски нескольких типов: очень крупные, многоклеточные, бородавчатые волоски, расположенные у основания листа (выше по краю листа встречаются более мелкие волоски); головчатые волоски с овальной одноклеточной головкой на короткой одноклеточной ножке; сосочковидные выросты эпидермиса, гладкие или слегка бородавчатые, чаще встречаются на верхней стороне листа и по краю.

 

 

 

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография

Приготовление растворов.

Раствор стандартного образца (СО) рутина. Около 0,005 г СО рутина растворяют в 10 мл спирта 70% и перемешивают. Срок годности раствора 1 мес при хранении в прохладном, защищенном месте.

Раствор стандартного образца (СО) лютеолин-7-гликозида. Около 0,01 г СО лютеолин-7-гликозида растворяют в 10 мл спирта 70% и перемешивают. Срок годности раствора 1 мес при хранении в прохладном, защищенном месте.

Раствор стандартных образцов (СО) тимола и карвакрола. Около 5 мг СО тимола и 10 мкл СО карвакрола растворяют в 10 мл метиленхлорида и перемешивают. Срок годности раствора 1 мес при хранении в прохладном, защищенном месте.

К 1,0 г измельченного сырья прибавляют 5 мл метиленхлорида, встряхивают в течение 3 мин и фильтруют через бумажный фильтр, содержащий 2 г натрия сульфата безводного (испытуемый раствор).

На линию старта хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флюоресцентным индикатором наносят в виде полос длиной 10 мм и шириной не более 2 мм 20 мкл (0,02 мл) испытуемого раствора и 20 мкл (0,02 мл) раствора СО тимола и карвакрола. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру, предварительно насыщенную метиленхлоридом в течение 1 ч, и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителей пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителя, просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

На хроматограмме раствора СО тимола и карвакрола в средней трети пластинки должна обнаруживаться зона адсорбции СО тимола фиолетового цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции на уровне зоны адсорбции СО тимола, зона адсорбции фиолетового цвета ниже зоны адсорбции СО тимола и одна зона адсорбции фиолетового цвета выше зоны адсорбции СО тимола.

Затем пластинку опрыскивают анисового альдегида раствором спиртовым сернокислым (2) и выдерживают при температуре 100-105°С в течение 10 мин и просматривают при дневном свете.

На хроматограмме раствора СО тимола и карвакрола должны обнаруживаться зона адсорбции СО карвакрола бледно-фиолетового цвета в средней трети пластинки и выше зона адсорбции СО тимола коричнево-розового цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться зоны адсорбции (в порядке возрастания): фиолетового цвета, сиреневато-фиолетового цвета, серовато-коричневого цвета, фиолетового цвета, серовато-розового цвета; зона адсорбции бледно-фиолетового цвета на уровне зоны адсорбции СО карвакрола и зона адсорбции коричневато-розового цвета на уровне зоны адсорбции СО тимола; допускается обнаружение других зон адсорбции (терпеноиды).

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля наносят в виде полос длиной 10 мм и шириной не более 2 мм 20 мкл (0,02 мл) испытуемого раствора, приготовленного для количественного определения суммы флавоноидов, 10 мкл (0,01 мл) раствора СО лютеолин-7-гликозида и 10 мкл (0,01 мл) раствора СО рутина. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 3 ч смесью растворителей бензол - уксусная кислота - вода (4:1:2), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают алюминия хлорида спиртовым раствором 2% и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

На хроматограмме раствора СО лютеолин-7-гликозида в верхней трети пластинки должна обнаруживаться зона адсорбции с флюоресценцией желтого цвета.

На хроматограмме раствора СО рутина в средней трети пластинки должна обнаруживаться зона адсорбции с флюоресценцией желтого цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться две зоны адсорбции с флюоресценцией желтого цвета на уровне зон адсорбции СО рутина и СО лютеолин-7-гликозида, зона адсорбции с флюоресценцией желтого цвета ниже зоны адсорбции СО рутина и зона адсорбции с флюоресценцией голубого цвета выше зоны адсорбции СО лютеолин-7-гликозида; допускается обнаружение других зон адсорбции (флавоноиды).

 

Испытания

 

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 13%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 12%.

Зола, не растворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 4,5%.

Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, - не более 5%. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, - не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, не более 5%.

Посторонние примеси

Стеблей, толщиной более 1 мм - не более 5%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 2%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 2%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье: эфирного масла не менее 1%, суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид не менее 1%, экстрактивных веществ, извлекаемых спиртом 70%, не менее 35%.

Приготовление растворов

Раствор стандартного образца (СО) лютеолин-7-гликозида. Около 0,020 г (точная навеска) СО лютеолин-7-гликозида, предварительно высушенного при температуре 130-135°С в течение 3 ч, растворяют в 85 мл спирта 96% в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор А СО лютеолин-7-гликозида). Срок годности не более 1 мес при хранении в прохладном, защищенном от света месте.

1,0 мл раствора А СО лютеолин-7-глиюкозида помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл алюминия хлорида спиртового раствора 2%, 0,05 мл уксусной кислоты разведенной 30%, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (раствор Б СО лютеолин-7-глюкозида).

Эфирное масло

В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания эфирного масла в лекарственном растительном сырье и лекарственных препаратах" (метод 1 или 2, из навески 50,0 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, время перегонки - 2 ч).

Сумма флавоноидов

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих через сито с отверстиями размером 1 мм.

Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл спирта 70%. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Горячее извлечение фильтруют через вату в мерную колбу вместимостью 100 мл.

Вату помещают в колбу для экстрагирования и прибавляют 30 мл спирта 50%. Экстракцию повторяют еще дважды в описанных выше условиях, фильтруя извлечение в ту же мерную колбу. Вату, оставшуюся после последнего фильтрования, промывают 10 мл спирта 70%. Затем объем извлечения доводят спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор А).

2,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл алюминия хлорида раствора 2%, 0,05 мл уксусной кислоты разведенной 30%, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (испытуемый раствор).

Через 30 мин измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 398 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения. В качестве раствора сравнения используют следующий раствор: 2,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 0,05 мл уксусной кислоты разведенной 30%, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б СО лютеолин-7-гликозида в аналогичных условиях. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 2 мл раствора А СО лютеолин-7-гликозида, 0,05 мл уксусной кислоты разведенной 30% и доведенный спиртом 96% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

 

,

 

где А - оптическая плотность испытуемого раствора;

 - оптическая плотность раствора СО лютеолин-7-гликозида;

 - навеска сырья, г;

 - навеска СО лютеолин-7-гликозида, г;

Р - содержание основного вещества в СО лютеолин-7-гликозида, %;

W - влажность сырья, %.

Экстрактивные вещества. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах", (метод 1, экстрагент - спирт 70%).

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС "Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".