Сушеницы топяной трава	ФС.2.5.0095.18
Gnaphalii uliginosi herba	Взамен ГФ XI, вып. 2, ст. 51

 

Собранная в начале цветения и высушенная трава с корнями дикорастущего однолетнего травянистого растения сушеницы топяной - Gnaphalium uliginosum L. s. l., сем. астровых - Asieraceae.

 

Подлинность

 

Внешние признаки. Цельное сырье. Цельные или частично измельченные олиственные стебли длиной до 30 см с серовато - белым войлочным опушением. Корни тонкие, стержневые, ветвистые. Стебли тонкие, цилиндрические, обычно от основания распростерто - ветвистые. Листья длиной 0,5-3,5 см, шириной 0,1-0,4 см, очередные, короткочерешковые, линейно - продолговатые, с туповатой верхушкой и выдающейся срединной жилкой. Соцветие состоит обычно из нескольких яйцевидных мелких корзинок длиной 0,3-0,4 см, плотно скученных клубочками на верхушках побегов и окруженных лучисторасходящимися листьями, превышающими клубочки соцветий. Обвертка корзинки состоит из 2-3 рядов черепитчато-расположенных темно-бурых листочков; наружные листочки яйцевидные, при основании войлочные, в верхней половине голые, блестящие; внутренние - продолговато-яйцевидные, заостренные, голые. Цветки мелкие, желтоватые, трубчатые, пятизубчатые. Плоды - семянки с хохолком из 10 отдельных волосков. Корни стержневые, ветвистые.

Цвет зеленовато-серый. Запах слабый. Вкус водного извлечения солоноватый.

Измельченное сырье. Кусочки стеблей, листьев, соцветий, корней, а также отдельные цветки, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм. Цвет зеленовато-серый. Запах слабый. Вкус водного извлечения солоноватый.

Микроскопические признаки. Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепаратов листа с поверхности должны быть видны клетки эпидермиса, с обеих сторон более или менее вытянутые по длине листа. Клетки эпидермиса верхней стороны листа должны быть со слабоизвилистыми стенками, с нижней стороны листа - с сильно извилистыми стенками. Клетки в основном прямоугольной формы, у основания и вершины листа вытянутые. Нижний эпидермис с извилистыми и сильноизвилистыми стенками, у основания и вершины листа клетки вытянуты и имеют более ровные стенки. Кутикула ровная. Устьица крупные, овально-округлые, погруженные окружены 4-5 клетками эпидермиса и ориентированы по длине листа (аномоцитный тип) должны встречаться редко; на нижней стороне их значительно больше. На поперечных и продольных срезах должны быть видны утолщенные наружные и внутренние стенки эпидермальных клеток. Открытые коллатеральные сосудисто-волокнистые пучки расположены по кругу с небольшими межпучковыми зонами, в которых межпучковая паренхима склерифицирована. Склеренхимные волокна в виде "шапочек" должны быть расположены над пучками, а также имеются в ксилеме. Сосуды спиральные и точечные должны быть представлены небольшими радиальными тяжами группами по 2-4. Кора должна быть отделена от центрального осевого цилиндра рядом клеток эндодермы. Сердцевина должна быть заполнена крупными паренхимными клетками. Волоски стебля аналогичны волоскам листа.

 

 

 

 

 

 

 

 

Эпидермис обвертки корзинки должен состоять из вытянутых прямоугольных клеток с ровными стенками и редко встречающихся аномоцитных устьиц. Кутикула ровная. Волоски должны быть такими же, как волоски листа, но головчатые волоски более крупные, насчитывающие до четырех клеток в высоту. Хохолок семени должен состоять из многочисленных пучковых многоклеточных волосков. Пыльца округлая шиповатая трехпоровая.

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография

Около 5,0 г (точная навеска) измельченного до однородной массы сырья, помещают в круглодонную колбу 250 мл, прибавляют 60 мл спирта 70% и нагревают на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 45 мин. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры и фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл через бумажный фильтр. В колбу со шротом добавляют 40 мл спирта 70%, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане в течение 15 мин. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу. Объем раствора доводят спиртом 70% до метки и тщательно перемешивают (раствор А).

20 мл раствора А упаривают до удаления запаха спирта на кипящей водяной бане. Водный остаток раствора А разбавляют водой очищенной до 30 мл и переносят в делительную воронку 100 мл. В ту же воронку добавляют 20 мл бутанола и встряхивают в течение 10 мин. Бутанольное извлечение переносят в колбу и упаривают на водяной бане под вакуумом досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл спирта 70% (испытуемый раствор).

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля наносят 20 мкл (0,02 мл) испытуемого раствора. Пластинку с нанесенной пробой сушат на воздухе в течение 10 мин, помещают в камеру со смесью растворителей: бутанол - уксусная кислота - вода (9:1:0,5) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителя пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе до удаления следов растворителей в течение 15 мин. Затем пластину обрабатывают алюминия хлорида спиртовым раствором 5%, выдерживают при температуре 100-105°С в сушильном шкафу в течение 10 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

На хроматограмме испытуемого раствора в верхней трети должны обнаруживаться две зоны адсорбции с флуоресценцией зеленого цвета (флавоноиды); допускается обнаружение дополнительных зон адсорбции ниже указанных зон адсорбции.

УФ-спектрофотометрия

В УФ-спектре испытуемого раствора, полученного при количественном определении, в области от 200 до 400 нм, должны регистрироваться максимумы поглощения при  нм и  нм и минимум поглощения при  нм.

Качественная реакция

Около 1,0 г сырья помещают в колбу вместимостью 25 мл и прибавляют 10 мл спирта 96%, соединяют с обратным холодильником и нагревают на водяной бане в течение 10 мин с момента закипания спирта в колбе. После охлаждения до комнатной температуры полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр.

В две одинаковые пробирки помещают по 2 мл полученного фильтрата, затем в одну из пробирок добавляют 0,5 мл алюминия хлорида спиртового раствора 2% (испытуемый раствор), а во вторую 0,5 мл спирта 96% (раствор сравнения), содержимое пробирок перемешивают. Через 20 мин в обе пробирки прибавляют по 10 мл воды очищенной, перемешивают содержимое и просматривают на белом фоне. Анализируемый раствор должен иметь желтый цвет и по интенсивности окраски заметно превосходить раствор сравнения (флавоноиды).

 

Испытания

 

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 13%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 20%.

Зола, не растворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 10%.

Измельченность сырья. Цельное сырье. Измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, - не более 5%. Измельченное сырье. Частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, - не более 10%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,31 мм, - не более 10%.

Посторонние примеси

Органической примеси. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 2%.

Минеральной примеси. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 2%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье. Сумма флавоноидов в пересчете на гнафалозид А - не менее 0,2%.

Приготовление растворов.

Приготовление колонки: 1,5 г порошка полиамида для колоночной хроматографии помещают в стакан вместимостью 50 мл, заливают 30 мл воды, перемешивают и выливают через воронку диаметром 3,5 см в колонку шириной 1,2 см и высотой 25 см, в нижнюю часть которой помещают небольшой ватный тампон, предварительно смоченный водой. Колонку заполняют при открытом кране. Элюирование проводят со скоростью 4 мл/мин.

Контрольный раствор. Контрольный раствор получают аналогично определяемой сумме флавоноидов путем пропускания 50 мл спирта 96% через колонку в мерную колбу вместимостью 50 мл. Объем раствора доводят спиртом 96% до метки и перемешивают.

Стандартный раствор калия бихромата. Около 0,03 г (точная навеска) калия бихромата, высушенного до постоянной массы, растворяют в серной кислоте растворе 0,005 М в мерной колбе вместимостью 1 л, доводят объем раствора тем же раствором до метки и перемешивают.

Серной кислоты раствор 0,005 М. К 1 л воды приливают 0,28 мл серной кислоты концентрированной и перемешивают.

Аналитическую пробу сырья измельчают до получения однородной массы. Около 5,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в патрон из фильтровальной бумаги и экстрагируют спиртом 96% в аппарате Сокслета с экстрактором вместимостью 150 мл на кипящей водяной бане в течение 5 ч ( сливов). Извлечение в круглодонной колбе вместимостью 100 мл упаривают по частям на кипящей водяной бане досуха.

К сухому остатку в колбе прибавляют 5 мл натрия хлорида раствора 10%, нагревают на кипящей водяной бане в течение 2 мин, растирая осадок стеклянной палочкой до растворения. После охлаждения раствор количественно переносят на колонку с полиамидным сорбентом. Операцию проводят два раза. Слив производят через воронку с ватным тампоном, предварительно смоченным водой.

Колонку промывают 10 мл воды, затем убирают ватный тампон и промывают колонку еще 20 мл воды. Водный элюат отбрасывают. Флавоноиды элюируют 50 мл спирта 96% со скоростью 4 мл/мин. Когда темно-желтая зона (в УФ-свете) подойдет к нижней части сорбента, элюат собирают в мерную колбу вместимостью 50 мл. Объем извлечения доводят спиртом 96% до метки и тщательно перемешивают.

1 мл полученного элюата переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, объем доводят раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (испытуемый раствор). Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 338 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором.

Параллельно измеряют оптическую плотность стандартного раствора калия бихромата. В качестве раствора сравнения используют серной кислоты раствор 0,005 М.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гнафалозид А в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

 

,

 

где А - оптическая плотность испытуемого раствора;

 - оптическая плотность стандартного раствора калия бихромата;

 - навеска калия бихромата, г;

 - навеска сырья, г;

0,2020 - коэффициент пересчета калия бихромата на гнафалозид А;

1,03 - поправочный коэффициент на неполное элюирование гнафалозида А с полиамидного сорбента;

W - влажность сырья, %.

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС "Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".