Собранные осенью, очищенные от остатков надземных частей и земли, промытые и высушенные корневища с корнями культивируемого или дикорастущего многолетнего травянистого растения рапонтикума сафлоровидного (син. Левзея сафлоровидная) - Rhaponticum carthamoides (Willd.) Iljin (syn. Leuzea carthamoides (Willd.) DC), сем. астровых - Asteraceae.

Подлинность

Внешние признаки. Цельное сырье. Корневище цельное или разрезанное, деревянистое, иногда с остатками стеблей длиной до 1 см, цилиндрическое, многоглавое разветвленное, снаружи неравномерно морщинистое, в изломе неровное, с многочисленными тонкими ветвящимися придаточными корнями. Корни упругие, мелкобороздчатые. Толщина корневищ до 3 см, длина корней - до 36 см. Цвет корневищ и корней снаружи от темного серовато-коричневого до почти черного, в изломе - бледно-желтый; часто встречаются корни с мелкими участками, лишенными коры. Запах слабый, своеобразный. Вкус слегка сладковатый, смолистый.

Измельченное сырье. Кусочки корней и корневищ различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм. Цвет желтовато-коричневый. Запах слабый, своеобразный. Вкус слегка сладковатый, смолистый.

Микроскопические признаки. Для приготовления препаратов используют корни диаметром 2-3 мм. На поперечном срезе видны следующие элементы. Покровная ткань - эпидермис; первичная кора широкая, состоит из округлоугловатых, тангентально вытянутых клеток, содержащих инулин в виде бесформенных, блестящих, сильно преломляющих свет "глыбок" (смотреть препарат без нагревания!). Вблизи эндодермы расположены крупные секреторные каналы в виде прерывистого пояса, они состоят из 4-5 крупных выделительных клеток, часто с мелкими каплями смолистого содержимого, окрашивающимися Суданом III в оранжево-красный цвет. Далее располагается эндодерма, клетки ее тангентально вытянуты, стенки утолщены. Клетки паренхимы вторичной коры значительно мельче, изредка встречаются одиночные призматические кристаллы и друзы оксалата кальция, линия камбия узкая. Древесина широкая, представлена в основном, одревесневшими волокнами (либриформом) и немногочисленными узкими сосудами и трахеидами. Сердцевинные лучи многорядные, клетки их вытянуты в радиальном направлении.

Определение основных биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля на полимерной подложке размером 10x15 см наносят 15 мкл испытуемого раствора (см. раздел "Количественное определение"), 2 мкл раствора СО экдистена (экдистерона) (см. раздел "Количественное определение"). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру со смесью растворителей хлороформ - метанол - ацетон (6:2:1) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, обрабатывают ванилина раствором 3% в спирте 96% и нагревают при температуре 105-110°С в течение 2 мин.

На хроматограмме раствора СО экдистена (экдистерона) должна обнаруживаться зона адсорбции желтовато-зеленого цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться не менее 2 зон адсорбции желтовато-зеленого цвета на уровне и выше зоны адсорбции СО экдистена (экдистерона).

Высокоэффективная жидкостная хроматография

На хроматограмме испытуемого раствора, полученной при количественном определении, время удерживания основного пика должно соответствовать времени удерживания основного пика на хроматограмме СО экдистена (экдистерона).

Испытания

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 13%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 9%.

Зола, не растворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 5%.

Измельченность сырья. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, - не более 10%; измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, - не более 20%.

Посторонние примеси

Другие части растения (остатки стеблей). Цельное сырье, измельченное сырье - не более 2%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 1%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 4%.

Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье: экдистена - не менее 0,10%.

Приготовление растворов.

Раствор стандартного образца (СО) экдистена. Около 0,01 г (точная навеска) СО экдистена помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в спирте 70%, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают.

Срок годности раствора 3 сут при хранении в защищенном от света месте.

Раствор ортофосфорной кислоты 0,05%. К 1000 мл воды прибавляют 0,5 мл ортофосфорной кислоты, перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Проверка пригодности хроматографической системы.

Хроматографическая система считается пригодной, если для хроматограммы раствора СО экдистена выполняются следующие условия:

- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по основному пику, должна быть не менее 30000 теоретических тарелок;

- фактор асимметрии (Т) основного пика не менее 0,8 и не более 1,5;

- относительное стандартное отклонение площади пика, рассчитанное по 5 повторным хроматограммам раствора СО экдистена, должно составлять не более 5%.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 7,5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в пакет из фильтровальной бумаги и помещают в экстрактор аппарата Сокслета с рабочим объемом около 150 мл. экстрагируют 120 мл метанолом в течение 7 час (25-30 сливов). Полученное извлечение количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора метанолом до метки и тщательно перемешивают. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм (испытуемый раствор).

20 мкл испытуемого раствора и 20 мкл раствора СО экдистена хроматографируют попеременно, получая не менее 5 хроматограмм раствора СО экдистена и не менее 3 хроматограмм испытуемого раствора в ниже приведенных хроматографических условиях.

Хроматографические условия:

Программа градиента:

Содержание экдистена в абсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

,

где S - площадь пика экдистена на хроматограмме испытуемого раствора;

 - площадь пика на хроматограмме раствора СО экдистена,

 - навеска сырья, г;

 - навеска СО экдистена, г;

Р - содержание основного вещества в СО экдистена, %;

W - влажность сырья, %.

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС "Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".