Собранные осенью или ранней весной, очищенные от остатков стеблей, листьев, тонких корней, отмытые от земли, разрезанные на куски и высушенные корни дикорастущих и культивируемых двулетних травянистых растений лопуха большого - Arctium lappa L., лопуха паутинистого (войлочного) - Arctium tomentosum Mill., лопуха малого - Arctium minus (Mill.) Bernh., сем. астровых - Asteraceae.

Подлинность

Внешние признаки. Цельное сырье. Цельные или разрезанные на куски корни, длиной 20-40 см (у лопуха большого и лопуха паутинистого) и 10-30 см (у лопуха малого), толщиной 2,0 - 3,5 см (у лопуха большого и лопуха паутинистого) и 1,5 - 2,5 см (у лопуха малого). Корни глубоко морщинистые, конусовидной формы, иногда спирально перекрученные. Излом неровный. Цвет снаружи темно-коричневый, на изломе желтовато-серый.

На поперечном разрезе под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) видна небольшая светлая кора, темная линия камбия и широкая желтоватая древесина пористо-лучевого строения. Запах слабый, характерный. Вкус водного извлечения горьковатый.

Измельченное сырье. При рассмотрении измельченного сырья под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) видны кусочки различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм.

Цвет желтовато-серый, иногда с частично сохранившейся морщинистой пробкой коричневого или темно-коричневого цвета. Запах слабый, характерный. Вкус водного извлечения горьковатый.

Порошок. При рассмотрении порошка под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) видны кусочки корней, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. При рассмотрении сырья под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) видны бесформенные кусочки корней желтовато-серого цвета, иногда с частично сохранившейся морщинистой пробкой коричневого или темно-коричневого цвета.

Цвет порошка от желтовато-серого до темно-коричневого. Запах слабый, характерный. Вкус водного извлечения горьковатый.

Микроскопические признаки. Цельное сырье. На поперечном срезе корня должны быть видна покровная ткань - пробка, представленная 2-3 рядами клеток темно-коричневого цвета. Клетки паренхимы коры крупные, тангентально-вытянутые со слегка утолщенными оболочками. Среди них хорошо виден ровный ряд клеток, иногда со светлым содержимым, окрашивающимся суданом III в оранжевый цвет. В ряду этих клеток встречаются секреторные образования (ходы) округлой или овальной формы с коричневым содержимым. Клетки паренхимы внутренней части коры округлые; у более крупных корней паренхима коры рыхлая. Проводящие элементы луба образуют небольшие участки конусовидной формы, разделенные сердцевинными лучами. Лубяные волокна многочисленные, с утолщенными стенками и широкой полостью, расположены большими и малыми группами или диффузно среди элементов флоэмы. Линия камбия четкая, состоит из нескольких рядов клеток. В древесине видны одиночные или радиально расположенные группы пористых и сетчатых широкополосных сосудов, окруженных трахеидами, отдельные группы трахеид; клетки паренхимы мелкие. Встречаются сосуды, заполненные коричневым содержимым. Сердцевинные лучи одно- или многорядные, клетки их округлые. Паренхимные клетки внутренней части коры, древесины и сердцевинных лучей содержат глыбки инулина (препарат без нагревания).

Иногда паренхима древесины разрушена по сердцевинным лучам и имеет узкие радиально вытянутые полости, доходящие до линии камбия.

Измельченное сырье. При рассмотрении "давленых" препаратов должны быть видны фрагменты пробки темно-коричневого цвета, фрагменты паренхимы коры с секреторными образованиями (ходами) с коричневым содержимым; фрагменты паренхимы с глыбками инулина; группы лубяных волокон с утолщенными стенками или их фрагменты; фрагменты пористых и сетчатых широкополосных сосудов и трахеид.

Порошок. При рассмотрении микропрепарата порошка должны быть видны фрагменты пробки темно-коричневого цвета, фрагменты паренхимы с глыбками инулина, фрагменты лубяных волокон с утолщенными стенками, фрагменты пористых и сетчатых широкополосных сосудов.

Определение основных групп биологически активных веществ

1. Тонкослойная хроматография

Раствор стандартного образца (СО) фруктозы. Около 0,1 г фруктозы растворяют в 100 мл воды и перемешивают. Срок годности раствора 10 сут при хранении в хорошо укупоренной упаковке, в прохладном защищенном от света месте.

Около 0,1 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в колбу со шлифом вместимостью 50 мл и прибавляют 10 мл воды. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, нагревают на плитке в течение 1 ч, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Затем колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор).

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля наносят 10 мкл испытуемого раствора и 5 мкл раствора СО фруктозы. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 30 мин смесью растворителей бутанол - уксусная кислота - эфир - вода (9:6:3:1), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают и сушат до удаления следов растворителей. Пластинку последовательно обрабатывают тимола раствором спиртовым 20%, затем серной кислотой разведенной 16% и выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100-105°С в течение 3 мин.

На хроматограмме СО фруктозы должна обнаруживаться зона адсорбции оранжево-красного цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться не менее двух зон адсорбции оранжево-красного цвета: зона адсорбции на уровне зоны адсорбции СО фруктозы, зона адсорбции ниже нее; допускается обнаружение других зон адсорбции оранжево-красного цвета (сахара).

2. Качественные реакции

При нанесении на поперечный срез корня, на соскоб частиц измельченных корней или порошок 2-3 капель тимола раствора спиртового 20% и 1 капли серной кислоты концентрированной должно наблюдаться оранжево-красное окрашивание (инулин).

Испытания

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 14%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 11%.

Зола, не растворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 4,5%.

Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, - не более 5%. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, - не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, - не более 5%. Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, - не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, - не более 5%.

Посторонние примеси

Корни, потемневшие на изломе. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 5%.

Остатки стеблей, в том числе отделенные при анализе, и другие части. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 5%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 0,5%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 1%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок: сумма полисахаридов в пересчете на фруктозу - не менее 8%; экстрактивных веществ, извлекаемых водой, - не менее 35%.

Полисахариды

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 60 мл воды и нагревают на плитке в течение 30 мин. Полученное извлечение охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 200 мл, избегая попадания сырья на фильтр. Экстракцию повторяют еще дважды, каждый раз используя по 30 мл воды: первый раз в течение 30 мин, а второй - в течение 15 мин.

Сырье переносят на бумажный фильтр, промывают колбу, а затем промывают остаток на фильтре, используя каждый раз по 10 мл воды. К полученному извлечению прибавляют 2 мл свинца (II) ацетата раствора 10%, перемешивают и оставляют на 10 мин. Затем прибавляют 2 мл натрия фосфата раствора 5%, перемешивают и оставляют на 5 мин. Затем доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10-15 мл фильтрата (раствор А).

5,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (раствор Б).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5 мл резорцина раствора спиртового 0,1%, прибавляют 5,0 мл раствора Б, доводят объем хлористоводородной кислотой 30% до метки и перемешивают (раствор В).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5 мл резорцина раствора спиртового 0,1%, прибавляют 5 мл воды, доводят объем хлористоводородной кислотой 30% до метки и перемешивают (раствор сравнения).

Колбы с раствором сравнения и раствором В нагревают на водяной бане при температуре 80°С в течение 20 мин, охлаждают, доводят объем извлечений в колбах тем же растворителем до метки.

Оптическую плотность раствора В измеряют на спектрофотометре при длине волны 482 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения.

Содержание суммы полисахаридов в пересчете на фруктозу и абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

,

где А - оптическая плотность раствора В;

 - удельный показатель поглощения продуктов реакции фруктозы с резорцином в кислой среде при длине волны 482 нм, равный 298;

 - навеска сырья, г;

W - влажность сырья, %.

Экстрактивные вещества. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах" (метод 1, экстрагент - вода).

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС "Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".