Крушины ольховидной коры экстракт сухой Rhamni frangulae corticis extractum siccum

Настоящая фармакопейная статья распространяется на Крушины экстракт сухой, получаемый из собранной весной до начала цветения и выдержанный не менее 1 года в сухом месте или подвергавшийся нагреванию при 100°С в течение 1 ч коры стволов и ветвей дикорастущего кустарника или небольшого деревца крушины ольховидной (син.: крушина ломкая) - Frangula alnus Mill. (syn.: Rhamnus frangula L.), сем. крушиновых - Rhamnaceae, экстракцией спиртом 70% при соотношении сырья и конечного продукта - (1,1-1,3) : 1, применяемый для производства нестерильных лекарственных средств.

Описание

Порошок от коричневого с зеленоватым оттенком до темно-коричневого цвета с характерным запахом. Гигроскопичен, комкуется.

Подлинность

Тонкослойная хроматография

Приготовление растворов

Раствор стандартного образца (СО) эмодина. Около 0,01 г СО эмодина растворяют в 25 мл спирта 96% и перемешивают. Срок годности раствора 1 мес.

Раствор натрия гидроксида водно-спиртовый 2%. 0,5 г натрия гидроксида помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 5 мл воды, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают.

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флуоресцентным индикатором, предварительно выдержанной в течение 1 ч при температуре 100-105°С, наносят в виде полос длиной 10 мм и шириной не более 2 мм по 10 мкл (0,01 мл) раствора А (см. раздел "Количественное определение") и раствора СО эмодина. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе и помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей этилацетат - спирт 96% - вода (7:2:1), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, пластинку вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, просматривают при дневном свете.

На хроматограмме раствора СО эмодина должна обнаруживаться зона адсорбции желтого цвета.

На хроматограмме раствора А должна обнаруживаться зона адсорбции от светло-желтого до желтого с оранжевым оттенком цвета на уровне зоны адсорбции на хроматограмме раствора СО эмодина.

Затем хроматограмму обрабатывают раствором натрия гидроксида водно-спиртовым 2% и просматривают при дневном свете.

На хроматограмме раствора СО эмодина должна обнаруживаться зона адсорбции розово-красного цвета.

На хроматограмме раствора А должна обнаруживаться зона адсорбции от светло-розового до розово-красного цвета на уровне зоны адсорбции СО эмодина (франгулоэмодин); допускается обнаружение зоны адсорбции на линии старта.

Качественные реакции

1. К 1 г экстракта прибавляют 1 мл спирта 96% и 10 мл воды, перемешивают, нагревают на водяной бане в течение 1 мин, затем охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат взбалтывают в делительной воронке с 10 мл эфира и отстаивают; эфирный слой должен окрашиваться в интенсивно-желтый цвет (хризофановая кислота).

2. 5 мл эфирного извлечения переносят в другую делительную воронку, прибавляют 5 мл аммиака водного и взбалтывают; водно-аммиачный слой должен окрашиваться в интенсивно-красный цвет (оксиметилантрахиноны).

Потеря в массе при высушивании. Не более 5,0%. В соответствии с требованиями ОФС "Потеря в массе при высушивании".

Тяжелые металлы. Не более 0,01%. В соответствии с требованиями ОФС "Экстракты".

Остаточные органические растворители. Не более 0,5%. В соответствии с требованиями ОФС "Остаточные органические растворители".

Остаточное количество этанола в экстракта определяют методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ).

Приготовление растворов

Стандартный раствор. 1,00 г этанола или 1,04 г спирта 96% помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, доводят объем до метки водой и перемешивают (раствор А).

1,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (раствор Б).

Проверка пригодности хроматографической системы.

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются условия:

- относительное стандартное отклонение площадей пика этанола для трех повторных введений стандартного раствора должно быть не более 5%;

- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику этанола на хроматограмме стандартного раствора, должна быть не менее 1000 теоретических тарелок;

- фактор асимметрии пика этанола должен быть не более 2.

Около 1 г (точная навеска) экстракта помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 25 мл, прибавляют 10,0 мл воды, закрывают пробкой и перемешивают в течение 10 мин при периодическом нагревании на водяной бане при температуре не более 40°С Затем смесь охлаждают, переносят в центрифужную пробирку, закрывают парафинированной пленкой и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин, после чего отбирают пипеткой около 2 мл надосадочной жидкости (испытуемый раствор).

По 1,0 мкл испытуемого раствора и стандартного раствора Б последовательно хроматографируют на газовом хроматографе с программным управлением и обработкой данных, получая для каждого раствора не менее 5 хроматограмм в следующих условиях:

- детектор пламенно-ионизационный;

- колонка капиллярная с фазой OV-624 длиной 30 м, с внутренним диаметром 0,53 мм или аналогичная при условии соблюдения требований теста "Проверка пригодности хроматографической системы";

- температура колонки - 45°С;

- температура детектора - 150°С;

- температура инжектора - 200°С;

- газ-носитель - гелий;

- скорость потока газа-носителя - 30 см/сек;

- расход водорода - 30 мл/мин;

- расход воздуха - 300 мл/мин.

Идентификацию этанола осуществляют путем сравнения времени удерживания пика на хроматограмме испытуемого раствора и пика этанола на хроматограмме стандартного раствора.

Содержание остаточного растворителя - этанола в экстракте (Х) в процентах рассчитывают по формуле:

,

где  - среднее значение площадей пиков определяемого компонента на хроматограммах стандартного раствора;

 - среднее значение площадей пиков определяемого компонента на хроматограммах испытуемого раствора

 - навеска этанола или спирта 96%, г;

 - навеска экстракта, г.

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на франгулаэмодин и сухое вещество в экстракта должно быть не менее 2,0%.

Около 0,5 г (точная навеска) экстракта помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 50 мл хлористоводородной кислоты разведенной 8,3% и нагревают при периодическом перемешивании на водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч. Не прекращая нагревание, в колбу через холодильник осторожно прибавляют 20 мл хлороформа и нагревают в течение 10 мин. Затем колбу, не снимая холодильник, вынимают из водяной бани и охлаждают до комнатной температуры. Содержимое колбы количественно переносят 5 мл хлороформа в делительную воронку вместимостью 250 мл. После разделения слоев, хлороформную фазу сливают в сухую коническую колбу, водяную фазу экстрагируют хлороформом еще 3 раза порциями по 15 мл, каждый раз перемешивая в течение 2 мин. Хлороформные извлечения объединяют, затем фильтруют через бумажный фильтр с 2 г натрия сульфата безводного, предварительно смоченного хлороформом, колбу и фильтр ополаскивают 3 мл хлороформа, который присоединяют к основному фильтрату.

Фильтрат упаривают на роторном испарителе при температуре водяной бани 60-65°С, остаток смешивают с 5 мл спирта 96% и наносят на колонку с полиамидом. Колбу ополаскивают 10 мл спирта 96%, который также наносят на колонку.

Элюат собирают в мерную колбу вместимостью 50 мл, элюирование проводят спиртом 96% порциями по 2 мл до достижения номинального объема мерной колбы. Затем содержимое мерной колбы тщательно перемешивают (раствор А).

1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 10 мл щелочно-аммиачного раствора, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (раствор Б).

Измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 530 нм, в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения. В качестве раствора сравнения используют спирт 96%.

Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на франгулаэмодин и сухое вещество в процентах (Х) вычисляют по формуле:

,

где A - оптическая плотность раствора Б;

 - навеска экстракта, г;

 - удельный показатель поглощения франгулаэмодина при длине волны 530 нм, равный 290;

W - потеря в массе при высушивании,%.

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС "Экстракты".