Тетрациклин Тетрациклин Tetracyclinum

Тетрациклин	ФС.2.1.0186.18
Тетрациклин
Tetracyclinum	Взамен ГФ X, ст. 664

 

(4S,4aS,5aS,6S,2aS)-3,6,10,12,12a-Пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,11-диоксо-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-октагидротетрацен-2-карбоксамид

 

 

М.м. 444,4

 

Cодержит не менее 88,0% и не более 102,0% тетрациклина  в пересчёте на сухое вещество.

Описание. Жёлтый кристаллический порошок.

* Гигроскопичен. При хранении на свету темнеет.

Растворимость. Очень мало растворим в воде, умеренно растворим в спирте 96%.

Подлинность

1. Тонкослойная хроматография. (ОФС "Тонкослойная хроматография")

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля октадецилсилильного .

Подвижная фаза (ПФ). Ацетонитрил - метанол - щавелевой кислоты раствор 6,3%, доведённый до рН  аммиака раствором концентрированным 20:20:60.

Испытуемый раствор. Растворяют 5,0 мг субстанции в 10,0 мл метанола.

Стандартный раствор А. Растворяют 5,0 мг стандартного образца тетрациклина гидрохлорида в 10,0 мл метанола.

Стандартный раствор Б. Растворяют 5,0 мг стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, 5,0 мг демеклоциклина гидрохлорида и 5 мг окситетрациклина гидрохлорида в 10,0 мл метанола.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора, стандартного раствора А и стандартного раствора Б. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе до удаления следов растворителей, и просматривают в УФ-свете при 254 нм.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора Б должны наблюдаться три четко разделенных зоны адсорбции.

Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению и совокупности интенсивности поглощения и величины должна соответствовать основной зоне адсорбции на хроматограмме стандартного раствора А.

2. Качественная реакция. К 50 мг субстанции прибавляют 2,0 мл серной кислоты концентрированной; появляется фиолетовое окрашивание, прибавляют 1 мл воды; окраска становится тёмно-жёлтой; при добавлении 1 капли железа(III) хлорида раствора 3% окраска переходит в коричневую или красно-коричневую.

3. Качественная реакция. Растворяют 10,0 мг субстанции в смеси 1,0 мл азотной кислоты разведенной 12,5% и 5,0 мл воды, свободной от диоксида водорода. Встряхивают и прибавляют 1,0 мл серебра нитрата раствор 1,7%. Опалесценция полученного раствора не должна превышать таковую смеси 1,0 мл азотной кислоты разведенной 12,5% и 5,0 мл воды, свободной от диоксида водорода и 1 мл серебра нитрата раствор 1,7%.

Удельное вращение от -260 до -280 в пересчёте на сухое вещество (0,5% раствор субстанции в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты, ОФС "Поляриметрия").

Удельный показатель поглощения. От 380 до 410 при длине волны 380 нм в пересчете на сухое вещество. Около 50 мг (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, растворяют в 2,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10,0 мл полученного раствора, прибавляют 75 мл воды, 5,0 мл гидроксида натрия раствора 5 М и доводят объём раствора водой до метки. Измерение проводят точно через 6 мин после добавления раствора гидроксида натрия (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

pH. От 3,0 до 7,0 (1% суспензия, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Подвижная фаза (ПФ). В мерную колбу вместимостью 1 л помещают 80,0 г 2-метил-2-пропанола, прибавляют 200 мл воды, свободной от диоксида углерода, 100 мл дикалия гидрофосфата раствора 3,5%, доведенного до рН 9,0 фосфорной кислотой разведенной 10%, 200 мл тетрабутиламмония гидросульфата раствора 1%, доведенного до рН 9,0 натрия гидроксида раствором 8,5% и 10 мл натрия эдетата раствора 4%, доведенного до рН 9,0 натрия гидроксида раствором 8,5%. Доводят объём раствора до метки водой, свободной от диоксида углерода.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25,0 мг субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор А. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25,0 мг стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 12,5 мг стандартного образца 4-эпитетрациклина гидрохлорида (гидрохлорид примеси A), растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор В. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10,0 мг стандартного образца ангидротетрациклина гидрохлорида (гидрохлорид примеси C), растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор Г. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10,0 мг стандартного образца 4-эпиангидротетрациклина гидрохлорида (гидрохлорид примеси D), растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения А. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл стандартного раствора А, 2,0 мл стандартного раствора Б и 5,0 мл стандартного раствора Г, доводят объём полученного раствора до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М.

Раствор сравнения Б. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 40,0 мл стандартного раствора Б, 20,0 мл стандартного раствора В и 5,0 мл стандартного раствора Г, доводят объём полученного раствора до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М.

Раствор сравнения В. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл стандартного раствора В и доводят объём раствора до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М.

Примечание:

примесь А: (4R,4aS,5aS,6S,2aS)-3,6,10,12,12a-пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,11-диоксо-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-октагидротетрацен-2-карбоксамид, CAS 79-85-6;

примесь B: (4S,4aS,5aS,6S,2aS)-2-ацетил-3,4a,6,10,12,12a-пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-4a,5a,6,12a-тетрагидротетрацен-1,11(4H,5H)-дион, CAS 6542-44-5;

примесь С: (4S,4aS,12aS)-3,10,11,12a-тетрагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,12-диоксо-1,4,4a,5,12,12a-гексагидротетрацен-2-карбоксамид, CAS 1665-56-1;

примесь D: (4R,4aS,12aS)-3,10,11,12a-тетрагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,12-диоксо-1,4,4a,5,12,12a-гексагидротетрацен-2-карбоксамид, CAS7518-17-4.

 

Хроматографические условия

 

Колонка	25,0x4,6 см, сополимер стирол-дивинилбензола, 8 мкм;
Температура колонки	60°С;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 254 нм;
Объём пробы	20 мкл;
Время хроматографирования	3-кратное от времени удерживания основного пика.

 

Хроматографируют испытуемый раствор и растворы сравнения А, Б, В.

Пригодность хроматографической системы определяют в соответствии с ОФС "Хроматография" со следующими уточнениями.

На хроматограмме раствора сравнения А:

- разрешение (R) между пиками примеси A (первый пик) и тетрациклина (второй пик) должно быть не менее 2,5;

- разрешение (R) между пиками тетрациклина и примеси D (третий пик) должно быть не менее 8,0;

- фактор асимметрии пика  тетрациклина должен быть не более 1,25.

На хроматограмме раствора сравнения В отношение сигнал/шум (S/N) для основного пика должно быть не менее 3.

При необходимости корректируют концентрацию 2-метил-2-пропанола в ПФ.

Для идентификации примесей A и D используют хроматограмму раствора сравнения А: порядок выхода компонентов: примесь А, тетрациклин, примесь D. Примесь C - присутствует на хроматограмме раствора сравнения Б и отсутствует на хроматограмме раствора сравнения А. Примесь B выходит на "хвосте" пика тетрациклина.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси A не должна быть более площади соответствующего пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 5,0%);

- площадь пика примеси B не должна быть более 0,4 площади пика примеси A на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 2,0%);

- площадь пика примеси C не должна быть более площади соответствующего пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 1,0%);

- площадь пика примеси D не должна быть более площади соответствующего пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,5%).

Потеря в массе при высушивании. Не более 13% (ОФС "Потеря в массе при высушивании", способ 1). Для определения используют около 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,5% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют около 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2 (ОФС "Тяжелые металлы", метод 2).

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота"

Количественное определение. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси" со следующими изменениями.

Хроматографируют испытуемый раствор и стандартный раствор А.

Содержание тетрациклина  в субстанции в процентах (X) в пересчёте на сухое вещество вычисляют по формуле:

 

 

где  - площадь пика тетрациклина на хроматограмме испытуемого раствора;

 - площадь пика тетрациклина на хроматограмме стандартного раствора А;

 - навеска субстанции, мг;

 - навеска стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, мг;

W - потеря в массе при высушивании, %;

Р - содержание основного вещества в стандартном образце тетрациклина гидрохлорида, %.

0,9241 - коэффициент пересчёта тетрациклина гидрохлорида в тетрациклин.

Хранение. В плотно закрытой упаковке в защищённом от света месте.

 

______________________________

* Приводится для информации.

______________________________