Стрептомицина сульфат Стрептомицин Streptomycini sulfas

N,N='Бис(аминоиминометил)-[O-2-дезокси-2-(метиламино)--L-глюкопиранозил--O-5-дезокси-3-С-формил--L-ликсофуранозил-(14)-D-стрептамина сульфат (2:3)

Стрептомицин образуется несколькими штаммами Streptomyces griseus. 1 мкг химически чистого стрептомицина основания соответствует специфической активности, равной одной единице действия (ЕД).

Содержит не менее 730 мкг/мг активного вещества в пересчёте на сухое вещество.

Описание. Белый или почти белый порошок. * Гигроскопичен.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, практически нерастворим в спирте 96%.

Подлинность.

1. Тонкослойная хроматография (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Калия дигидрофосфата раствор 0,5 М.

Испытуемый раствор. 10 мг субстанции растворяют в 10 мл воды.

Раствор сравнения А. 10 мг стандартного образца стрептомицина сульфата растворяют в 10 мл воды.

Раствор сравнения Б. 10 мг стандартного образца стрептомицина сульфата, 10 мг стандартного образца канамицина моносульфата и 10 мг стандартного образца неомицина сульфата растворяют в 10 мл воды.

Раствор 1,3-дигидроксинафталина в растворе серной кислоты. Смешивают равные объёмы 1,3-дигидроксинафталина 0,2% раствора и серной кислоты 50% раствора.

На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора, раствора сравнения А и раствора сравнения Б. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат в токе холодного воздуха до удаления следов растворителей, опрыскивают раствором 1,3-дигидроксинафталина в растворе серной кислоты и выдерживают при температуре 150°С в течение 5-10 мин. Пластинку охлаждают и просматривают при дневном свете.

Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора сравнения Б четко обнаруживаются 3 зоны адсорбции.

Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора должна находиться на уровне зоны адсорбции на хроматограмме раствора сравнения А.

2. Качественная реакция. 8 мг субстанции растворяют в 4 мл воды, прибавляют 1 мл натрия гидроксида раствора 1 М. Нагревают на водяной бане в течение 4 мин. Полученный раствор нейтрализуют хлористоводородной кислоты раствором 2 М и прибавляют 0,1 мл железа (III) хлорида раствора 1%; раствор должен окраситься в фиолетовый цвет.

3. Качественная реакция. 0,1 г субстанции растворяют в 2 мл воды, прибавляют 1 мл -нафтола раствора 0,1% и 2 мл натрия гипохлорита раствора 1,5%; должно наблюдаться красное окрашивание.

4. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию на сульфаты (ОФС "Общие реакции на подлинность").

рН. От 4,5 до 7,0 (25% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Стрептомицин В. Испытание проводят методом ТСХ (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Уксусная кислота ледяная - метанол - толуол 1:1:2.

Испытуемый раствор. Около 0,2 г субстанции помещают в колбу для перегонки вместимостью 50 мл, растворяют при энергичном перемешивании в 5 мл свежеприготовленной смеси серная кислота концентрированная - метанол 3:97. Содержимое колбы кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч, охлаждают, промывают холодильник 10 мл метанола, собирая смывы в колбу с раствором, и доводят объём полученного раствора метанолом до 20 мл.

Раствор сравнения. Около 36 мг (точная навеска) D-маннозы помещают в колбу для перегонки вместимостью 50 мл, растворяют при энергичном перемешивании в 5 мл свежеприготовленной смеси серная кислота концентрированная - метанол 3:97. Содержимое колбы кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч, охлаждают, промывают холодильник 10 мл метанола, переносят количественно полученный раствор в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объём раствора метанолом до метки. 5,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объём раствора метанолом до метки.

Полученный раствор содержит эквивалент 0,03% раствора стрептомицина В (1 мг D-маннозы соответствует 4,13 мг стрептомицина В).

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Смешивают по 1 мл испытуемого и стандартного растворов.

На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора, стандартного раствора и раствора для проверки пригодности хроматографической системы. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом, предварительно насыщая камеру парами растворителей в течение не менее 12 ч. Когда фронт ПФ пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и опрыскивают свежеприготовленной смесью равных объёмов 0,2% раствора 1,3-дигидроксинафталина в спирте 96% и 20% раствора серной кислоты. Пластинку выдерживают при температуре 110°С в течение 5 мин, охлаждают и просматривают при дневном свете.

Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы видны 2 чётко разделённых зоны адсорбции.

Зона адсорбции стрептомицина В на хроматограмме испытуемого раствора по совокупности величины и интенсивности окраски не должна превышать зону адсорбции, полученную на хроматограмме стандартного раствора (не более 3%).

Потеря в массе при высушивании. Не более 5,0%. Около 1,0 г (точная навеска) субстанции сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре 60°С и остаточном давлении, не превышающем 0,7 кПа (5 мм рт. ст.) в течение 3 ч.

Сульфатная зола. Не более 1,0% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют около 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Сульфаты. От 18,0 до 21,5% в пересчете на сухое вещество.

Около 0,25 г (точная навеска) субстанции растворяют в 100 мл воды при тщательном перемешивании, рН полученного раствора доводят до 11 (потенциометрически) аммиака раствором 13,5 М. К полученному раствору прибавляют 10 мл бария хлорида раствора 0,1 М и около 0,5 мг индикатора фталеинового пурпурного. Избыток бария хлорида раствора 0,1 М титруют 0,1 М раствором натрия эдетата раствором 0,1 М до начала изменения окраски, прибавляют 50 мл спирта 96% и продолжают титрование до исчезновения фиолетово-голубого окрашивания раствора.

1 мл бария хлорида раствора 0,1 М соответствует 9,606 мг сульфат-ионов.

Колориметрический тест. 1,5% раствор железа(III) хлорида в 0,5 М растворе серной кислоты. 15 г железа(III) хлорида помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, растворяют в 250 мл 0,5 М раствора серной кислоты и доводят объём раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. Субстанцию сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре 60°С и остаточном давлении, не превышающем 0,7 кПа (5 мм рт. ст.) в течение 3 ч. 0,1 г высушенной субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор. 0,1 г стандартного образца стрептомицина сульфата, высушенного, как указано для испытуемого раствора, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. К 5 мл воды прибавляют 5 мл 0,2 М раствора натрия гидроксида и нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин. Затем колбу помещают на 5 мин в баню со льдом, прибавляют 3 мл 1,5% раствора железа (III) хлорида в 0,5 М растворе серной кислоты и доводят объём раствора водой до метки.

По 5,0 мл испытуемого и стандартного растворов помещают в мерные колбы вместимостью 25 мл. В каждую колбу прибавляют по 5,0 мл натрия гидроксида раствора 0,2 М и нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин. Затем колбу помещают на 5 мин в баню со льдом, прибавляют 3 мл 1,5% раствора железа (III) хлорида в 0,5 М растворе серной кислоты и доводят объёмы растворов водой до метки. Через 20 мин измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов в кювете с толщиной слоя 10 мм в максимуме поглощения при 525 нм относительно раствора сравнения.

Величина оптической плотности испытуемого раствора должна составлять не менее 90,0% от величины оптической плотности стандартного раствора.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

** Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС "Аномальная токсичность"). Тест-доза: 1,3 мг субстанции в 0,5 мл воды для инъекций на мышь. Срок наблюдения 48 ч.

** Бактериальные эндотоксины. Не более 0,25 ЕЭ на 1 мг стрептомицина (ОФС "Бактериальные эндотоксины").

** Стерильность. Субстанция должна быть стерильной (ОФС "Стерильность").

Количественное определение. Проводят определение в соответствии с ОФС "Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар".

Хранение. В плотно закрытой упаковке, в защищённом от света месте.

______________________________

** Контроль по показателям качества "Аномальная токсичность", "Бактериальные эндотоксины" и "Стерильность" проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

______________________________