-
- Главная
- Фармакопея
- ФСО
- Общая информация
Утверждена приказом: | Приказ Минздрава России от 31.10.2018 № 749 |
Дата введения в действие: | c 01.12.2018 |
Издание: | Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания |
Раздел: | 1.8.2. Методы анализа лекарственных препаратов из крови и плазмы крови человека и животных |
Тип: | Общая фармакопейная статья (ОФС) |
Номер: | ОФС.1.8.2.0010.18 |
Внутр.№: | 2471.1 |
Статус: | Действующая статья |
Количественное определение белка колориметрическим методом с биуретовым реактивом в препаратах крови человека и животных |
Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод количественного определения белка колориметрическим методом с биуретовым реактивом в препаратах крови человека (иммуноглобулинах, альбумине) и животных (антитоксических сыворотках) (Метод А) и на методику количественного определения белка колориметрическим методом с биуретовым реактивом в препаратах крови животных (гетерологичные иммуноглобулины и антитоксические сыворотки), разведенных в 100 раз (Метод Б).
Методы основаны на взаимодействии в щелочной среде пептидных связей молекул белков с ионами двухвалентной меди с образованием биуретового комплекса, окрашенного в фиолетовый цвет, интенсивность которого, измеряемая при длине волны 540 нм, прямо пропорциональна содержанию белка в препарате.
Колориметрический метод с биуретовым реактивом обладает низкой чувствительностью к посторонним веществам, которые могут присутствовать в качестве примеси в препарате.
К 5 мл испытуемого раствора, приготовленного из испытуемого образца с содержанием белка от 2 до 4 мг/мл, прибавляют 5 мл биуретового реактива для препаратов крови человека и животных, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. При тех же условиях аналогичным образом готовят стандартный раствор (СО). Испытуемые и стандартные растворы готовят в двух повторностях. Одновременно готовят контрольный раствор, используемый в качестве раствора сравнения, содержащий 5 мл 0,9% раствора натрия хлорида и 5 мл биуретового реактива. Измеряют оптическую плотность окрашенных растворов при длине волны 540 нм (если нет других указаний в нормативной документации) в кюветах с толщиной слоя 10 мм.
Содержание белка (X) в препарате в процентах вычисляют по формуле:
А - значение оптической плотности раствора испытуемого образца;
Ао - значение оптической плотности СО;
Со - содержание белка в СО, в процентах.
1. Испытуемый раствор (А). 1 или 2 мл испытуемого образца (в зависимости от исходного содержания белка) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора 0,9% раствором натрия хлорида до метки и перемешивают. Содержание белка в испытуемом растворе от 2 до 4 мг/мл.
1. Стандартный раствор (СО). Для препаратов иммуноглобулинов, альбумина и антитоксических сывороток используют соответствующие стандартные образцы, разрешенные к применению уполномоченными органами в соответствии с инструкциями по применению. Допускается использование стандартных образцов предприятия, аттестованных с использованием вышеуказанных стандартных образцов.
2. Биуретовый реактив для препаратов крови человека и животных. В мерную колбу вместимостью 1000 мл вносят 45 г калия-натрия тартрата, растворяют в 200 мл 0,2 М раствора натрия гидроксида, прибавляют 5 г меди (II) сульфата, затем прибавляют 5 г калия иодида и доводят объем тем же раствором натрия гидроксида до метки и перемешивают.
К 5 мл раствора испытуемого образца с содержанием белка в препарате от 0,8 до 1,3 мг/мл прибавляют 5 мл биуретового реактива для препаратов крови человека и животных, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Аналогичным образом готовят разведенный 1:100 стандартный образец (СО). Одновременно готовят контрольный раствор (см. приготовление по методу А). Испытуемые и стандартные образцы готовят в двух повторностях. Далее анализ проводят по методу А.
Содержание белка (X) в разведенном препарате 1:100 в процентах рассчитывают по формуле:
- значение оптической плотности испытуемого образца, разведенного 1:100;
Dco - значение оптической плотности СО, разведенного 1:100;
Сco - содержание белка в СО, в процентах.
1. Разведенный стандартный образец. Используют соответствующие стандартные образцы (иммуноглобулина или антитоксической сыворотки), разрешенные к применению уполномоченными органами в соответствии с инструкциями по применению.1 мл стандартного образца с содержанием белка от 80 до 160 мг/мл помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора 0,9% раствором натрия хлорида до метки и перемешивают. Допускается использование стандартных образцов предприятия, аттестованных с использованием вышеуказанных стандартных образцов.
2. Буретовый реактив для препаратов крови человека и животных. (см. Примечания N 3 Метод А).