Спектрофотометрический метод

К 1 мл испытуемого образца прибавляют 5 мл 0,5 М раствора хлорной кислоты и перемешивают. Смесь нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин. После охлаждения гидролизат центрифугируют в течение 20 мин при 2000 об/мин, отделяют осадок от надосадочной жидкости и измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости в кювете с толщиной слоя 10 мм при 270 и 290 нм по сравнению с контрольным раствором, содержащим 1 мл воды очищенной и 5 мл 0,5 М раствора хлорной кислоты.

Содержание нуклеиновых кислот (Х) в мкг/мл вычисляют по формуле:

,

где: и - значения оптической плотности, при соответствующих длинах волн;

0,19 - коэффициент удельной экстинкции нуклеиновых кислот (среднее значение разницы показаний оптической плотности , соответствующее содержанию 1 мкг фосфора нуклеиновых кислот в 1 мл испытуемого раствора);

10,3 - коэффициент пересчета количества фосфора на нуклеиновые кислоты, мкг/мл;

6 - разведение испытуемого образца.

Метод применим при выполнении условия: показания оптической плотности при и не должны отличаться более чем на 15%.

Содержание нуклеиновых кислот в БЛП должно составлять от 15 до 35 мкг/мл.

Примечания

Испытуемый раствор. 1 мл испытуемого образца или приготовленного, как указано в фармакопейной статье и нормативной документации.

0,5 М раствор хлорной кислоты. Раствор готовят с учетом удельного веса и процентной концентрации исходного раствора хлорной кислоты.

Приготовление 0,5 М раствора хлорной кислоты из 70% раствора. В мерную колбу вместимостью 1000 мл вносят 42,07 мл 70% раствора хлорной кислоты с удельным весом 1,664, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят в склянке с притертой пробкой при температуре от 18 до 25°С в течение 12 мес.