-
- Главная
- Фармакопея
- ФСО
- Общая информация
Утверждена приказом: | Приказ Минздрава России от 31.10.2018 № 749 |
Дата введения в действие: | c 01.12.2018 |
Издание: | Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания |
Раздел: | 1.7.2. Методы анализа биологических лекарственных препаратов |
Тип: | Общая фармакопейная статья (ОФС) |
Номер: | ОФС.1.7.2.0024.18 |
Внутр.№: | 2439.1 |
Статус: | Действующая статья |
Количественное определение формальдегида в биологических лекарственных препаратах |
Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для количественного определения формальдегида в биологических лекарственных препаратах (БЛП) в реакциях взаимодействия формальдегида с фуксинсернистым реактивом или с ацетилацетоном колориметрическим методом.
Метод с фуксинсернистым реагентом основан на образовании хиноидного красителя малинового окрашивания при его взаимодействии с водорастворимыми альдегидами позволяет определять содержание формальдегида в БЛП в диапазоне от 20 до 80 мкг/мл в пробе. Метод А.
Метод с ацетилацетоновым реагентом основан на образовании соединения желтого окрашивания при его взаимодействии с формальдегидом в присутствии ионов аммония, позволяет определять содержание формальдегида в БЛП в диапазоне от 2 до 20 мкг/мл в пробе. Метод В.
Интенсивность окраски образующихся соединений пропорциональна содержанию формальдегида в испытуемом образце.
Для анализа готовят две параллельные пробы испытуемого образца.
В химические пробирки отбирают 0,5 - 2,0 мл (в зависимости от содержания формальдегида) надосадочной жидкости сорбированного образца (испытуемый образец сорбированного лекарственного препарата предварительно центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин) или такое же количество несорбированного образца, доводят объем раствора водой очищенной до 5 мл и перемешивают, затем прибавляют 1 мл раствора фуксинсернистой кислоты и вновь перемешивают. Пробирки закрывают пробками и оставляют на 1 ч. Измеряют оптическую плотность при 590 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором, содержащим 5 мл воды очищенной и 1 мл раствора фуксинсернистой кислоты.
Содержание формальдегида в мкг/мл вычисляют по формуле:
где: а - содержание формальдегида, найденное по калибровочному графику, мкг;
А - объем испытуемого образца, мл.
Содержание формальдегида в ИЛП не должно превышать 0,02% (200 мкг/мл).
Построение калибровочного графика. К 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0 мл стандартного раствора N 2 прибавляют воду очищенную до объема 5 мл, перемешивают (содержание формальдегида: 20; 30; 40; 50; 60; 70; 80 мкг), прибавляют 1 мл раствора фуксинсернистой кислоты и вновь перемешивают. Далее анализ проводят, как указано выше. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество формальдегида в мкг, а по оси ординат - среднее значение оптической плотности калибровочных растворов.
Испытуемый раствор. На анализ отбирают 0,5, 1,0 или 2,0 мл испытуемого образца в зависимости от содержания формальдегида в лекарственном препарате (количество формальдегида в анализируемом образце должно быть в пределах 20 - 80 мкг).
Основной стандартный раствор формальдегида с содержанием формальдегида около 4 мг/мл (раствор N 1). В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 1 мл формалина технического, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают.
Определяют процентное содержание формальдегида в формалине техническом. В колбу с притертой пробкой переносят 5 мл раствора N 1, прибавляют 20 мл 0,05 М раствора йода и 10 мл 1 М раствора натрия гидроксида, перемешивают и оставляют в темном месте на 10 мин. Затем прибавляют 11 мл 0,5 М раствора серной кислоты. Выделившийся йод, образующий коричнево-красное окрашивание раствора, титруют 0,1 N раствором натрия тиосульфата до появления соломенно-желтого окрашивания, затем добавляют 0,5% раствор крахмала (индикатор) и продолжают титрование до обесцвечивания раствора. На титрование контрольного раствора отбирают 5 мл воды очищенной и прибавляют реактивы, указанные выше для раствора N 1.
Содержание формальдегида в процентах рассчитывают по формуле:
где: а - объем 0,1 N раствора натрия тиосульфата, пошедшее на титрование контрольного раствора, мл;
б - объем 0,1 N раствора натрия тиосульфата, пошедшее на титрование раствора N 1, мл;
К - поправочный коэффициент к титру 0,1 N раствора натрия тиосульфата;
100* - разведение формалина технического; мл
100 - коэффициент пересчета в проценты;
0,001501 - количество формальдегида, соответствующее 1 мл 0,05 М раствора йода, г.
Содержание формальдегида в формалине техническом должно быть не менее 36%.
Содержания формальдегида в стандартном растворе N 1 в мг/мл рассчитывают по формуле:
где: - содержание формальдегида в формалине техническом, %;
Полученный раствор хранят при температуре от 2 до 8°С не более 1 мес.
Стандартный раствор формальдегида 20 мкг/мл (раствор N 2). Необходимое количество раствора N 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают (если установлено, что концентрация формальдегида в формалине техническом 37%, то для приготовления стандартного раствора формальдегида N 2 отбирают 0,54 мл основного стандартного раствора N 1). Стандартный раствор N 2 используют свежеприготовленным.
Приготовление раствора фуксинсернистой кислоты. На кипящей водяной бане растворяют 1 г фуксина основного или парафуксина (для фуксинсернистой кислоты) в 500 мл воды очищенной. Раствор охлаждают до температуры 18 - 20°С, фильтруют в мерную колбу, вместимостью 1000 мл и прибавляют 30 мл 20% раствора калия метабисульфита или 25 мл 20% раствора натрия метабисульфита. Через 20 мин к смеси прибавляют 10 мл хлористоводородной кислоты концентрированной, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и выдерживают не менее сут.
Перед каждым использованием раствор фуксинсернистой кислоты титруют 0,05 М раствором йода (индикатор: 0,5% раствор крахмала). На титрование 3 мл фуксинсернистой кислоты должно расходоваться от 3 до 4 мл раствора йода. Если объем раствора йода, израсходованного на титрование, меньше 3 мл, то к 100 мл приготовленного реактива прибавляют калий (или натрий) метабисульфит из расчета 200 мг на каждый миллилитр разницы между 3 мл и израсходованным объемом раствора йода. Если объем раствора йода, израсходованный на титрование, больше 4 мл, то к 100 мл реактива прибавляют раствор фуксина основного или парафуксина в мл в количестве, рассчитанным по формуле:
где: V - объем 0,05 М раствора йода, пошедший на титрование 3 мл реактива, мл;
100 - объем фуксинсернистой кислоты, мл;
Реактив готов к применению через сутки после приготовления. Раствор должен быть бесцветным, допускается слегка желтоватая окраска. Для его осветления раствора возможно применение активированного угля.
Реактив хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре в течение 1 г.
Приготовление 0,1 N раствора натрия тиосульфата. Раствор натрия тиосульфата готовят из стандарт-титра (фиксанала) 0,1 М раствора натрия тиосульфата в мерной колбе вместимостью 1000 мл. Раствор хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре в течение 3 мес.
Приготовление 20% раствора натрия (калия) метабисульфита. В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 20 г натрия (калия) метабисульфита, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Реактив хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре в течение 6 мес.
Для анализа готовят две параллельные пробы испытуемого образца. 2 мл надосадочной жидкости сорбированного (испытуемый образец сорбированного лекарственного препарата предварительно центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин) или несорбированного испытуемого образца с содержанием формальдегида от 2 до 20 мкг/мл помещают в химическую пробирку, добавляют 2 мл ацетилацетонового реагента, закрывают пробкой, перемешивают и выдерживают на водяной бане при температуре 40°С в течение 40 мин, затем охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность испытуемого образца при 400 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольной пробой, содержащей 2 мл воды очищенной и 2 мл ацетилацетонового реагента. Испытуемый образец сорбированного лекарственного препарата предварительно центрифугируют при 4000 об/мин в течение 10 мин.
Концентрацию формальдегида в испытуемом образце вычисляют по формуле:
где: a - количество формальдегида в пробе, найденное по калибровочному графику, в мкг;
b - объем испытуемого образца, взятый на анализ, мл.
Построение калибровочного графика. Калибровочные растворы готовят, используя стандартный раствор формальдегида, с концентрацией 20 мкг/мл (раствор N 2), приготовленный из основного раствора формальдегида с учетом титра данного раствора (около 4 мг/мл, раствор N 1) (табл).
Таблица - Стандартные растворы с концентрацией формальдегида 1 - 20 мкг/ проба
Концентрация формальдегида в калибровочном растворе; мкг/проба |
||
В каждую пробирку с калибровочным раствором соответствующей концентрации прибавляют воду очищенную до объема 2 мл и перемешивают, добавляют 2 мл ацетилацетонового реагента и вновь перемешивают. Далее анализ проводят, как указано выше для испытуемого образца. Калибровочную кривую строят, откладывая по оси абсцисс значения концентраций, по оси ординат - значения оптической плотности калибровочных растворов. Коэффициент корреляции должен быть не менее 0,99.
Испытуемый раствор. На анализ отбирают 2 мл испытуемого образца, если нет иных указаний в нормативной документации (количество формальдегида в анализируемом образце должно быть в пределах 2 - 20 мкг).
Основной стандартный раствор формальдегида с содержанием около 4 мг/мл. (раствор N 1). Методика приготовления указана в методе А.
Стандартный раствор формальдегида 20 мкг/мл (раствор N 2). Методика приготовления указана в методе А.
Ацетилацетоновый реагент. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 150 г аммония ацетата, добавляют 3 мл уксусной кислоты ледяной, 700 мл воды, перемешивают и измеряют рН (5,5-6,5), затем прибавляют 2 мл ацетилацетона, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Реагент хранят в течение 1 г при температуре 2 - 8°С.