-
- Главная
- Фармакопея
- ФСО
- Общая информация
Утверждена приказом: | Приказ Минздрава России от 31.10.2018 № 749 |
Дата введения в действие: | c 01.12.2018 |
Издание: | Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания |
Раздел: | 1.7.1. Иммунобиологические и биотехнологические лекарственные препараты |
Тип: | Общая фармакопейная статья (ОФС) |
Номер: | ОФС.1.7.1.0012.18 |
Внутр.№: | 2327.1 |
Статус: | Действующая статья |
Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на интерфероны, полученные с использованием технологии рекомбинантной ДНК с применением в качестве экспрессионной системы бактериальных клеток или клеток млекопитающих.
Интерфероны (ИФН) относятся к группе цитокинов и представляют собой глобулярные белки, которые являются полифункциональными биорегуляторами широкого спектра действия.
Основные биологические свойства интерферонов проявляются в их противовирусном, антипролиферативном и иммуномодулирующем действии.
По происхождению различают три типа интерферонов: - лейкоцитарный (продуцируется лейкоцитами, плазмоцитоидными дендритными клетками, моноцитами/макрофагами),
- фибробластный (продуцируется фибробластами и эпителиальными клетками),
-иммунный (продуцируется Т-лимфоцитов и натуральными киллерами,).
По способу получения ИФН делятся на природные (ИФН первого поколения) и рекомбинантные, полученные с помощью генно-инженерной технологии (ИФН второго поколения).
Природный интерферон человеческий лейкоцитарный представляет собой группу белков (интерфероны альфа-типа), синтезируемых лейкоцитами, полученными из крови клинически здоровых доноров в ответ на воздействие вируса-индуктора интерферона (вирус болезни Ньюкасла или вирус Сендай). Требования к производству и оценке качества препаратов этого типа описаны в ФС "Интерферон человеческий лейкоцитарный".
Требования, приведенные в настоящей фармакопейной статье, могут быть дополнены с учетом специфических свойств лекарственного средства и технологии его производства.
Данная статья не распространяется на модифицированные (пегилированные) интерфероны.
Аминокислотная последовательность
CDLPQTHSLG SRRTLMLLAQ MRRISLFSCL KDRHDFGFPQ
EEFGNQFQKA ETIPVLHEMI QQIFNLFSTK DSSAAWDETL
LDKFYTELYQ QLNDLEACVI QGVGVTETPL MKEDSILAVR
KYFQRITLYL KEKKYSPCAW EVVRAEIMRS FSLTSNLQES
Рекомбинантные представляют собой негликозилированные белки, состоящие из 165 аминокислот и содержащие две дисульфидные связи: между остатками цистеина в 1-м и 98-м положениях и в 29-м и 138-м положениях. Молекулярная масса негликозилированного белка составляет около 19300 Да. Продуцентом
являются генетически модифицированные клетки Esherichia coli, полученные путем трансформации исходного штамма вектором, содержащим ген
человека. В структуре молекулы, образующейся при синтезе рекомбинантного белка рибосомой бактериальной клетки, имеется N-концевой метионин в отличие от эндогенного интерферона, который N-концевым аминокислотным остатком содержит цистеин, связанный дисульфидной связью с 98 цистеином белка. Подсемейства
2а и 2b различаются аминокислотами в положениях 23: лизин и аргинин, соответственно.
Аминокислотная последовательность
MSYNLLGFLQ RSSNFQCQKL LWQLNGRLEY CLKDRMNFDI
PEEIKQLQQF QKEDAALTIY EMLQNIFAIF RQDSSSTGWN
ETIVENLLAN VYHQINHLKT VLEEKLEKED FTRGKLMSSL
HLKRYYGRIL HYLKAKEYSH CAWTIVRVEI LRNFYFINRL
Интерферон бета-1а идентичен эндогенному ИФН человека, представляет собой гликозилированный белок, состоящий из 166 аминокислотных остатков с одной внутрицепочечной дисульфидной связью, имеющий один сайт N-гликозилирования по аспарагиновому остатку в позиции 80 и цистеин в позиции 17. Молекулярная масса 22 500 Да. Известны 6 гликоформ , обусловленных дифференциальным гликозилированием сайта и отличающихся количеством олигосахаридов и степенью их сиалирования. Продуцент
- генетически модифицированная культура клеток яичника китайского хомячка (СНО).
Аминокислотная последовательность
SYNLLGFLQR SSNFQSQKLL WQLNGRLEYC LKDRMNFDIP EEIKQLQQFQ
KEDAALTIYE MLQNIFAIFR QDSSSTGWNE TIVENLLANV
YHQINHLKTV LEEKLEKEDF TRGKLMSSLH LKRYYGRILH YLKAKEYSHC
Интерферон бета-1b модифицирован по отношению к природному, представляет собой негликозилированный белок, состоящий из 166 аминокислотных остатков той же последовательности, за исключением позиции 17 - серин. Не содержит N-концевого метионина. Молекулярная масса 18000-20000 Да. Продуцент рекомбинантного - клетки Escherichia coli, в геном которых внедрен ген человеческого
.
Интерферон-гамма представляет собой белок, молекула которого состоит из нековалентно связанного димера двух одинаковых мономеров. Состоит из 140 аминокислотных остатков и содержит N-концевой метионин. Молекулярная масса 16 495 Да. Отличается от нативного белка делецией 10 аминокислотных остатков на С-конце молекулы и заменой кластера KRKR на KGSA. Метод получения - рекомбинантная технология.
Производство ИФН осуществляется с применением технологии рекомбинантной ДНК и должно проводиться в условиях соблюдения правил надлежащей производственной практики.
Экспрессирующая конструкция, штамм-продуцент, производство лекарственного средства, включая банки штаммов-продуцентов, должны быть охарактеризованы в объёме и в соответствии с требованиями, изложенными в ОФС "Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК".
В качестве клеток-хозяина для создания штамма-продуцента ИФН используются бактериальные клетки или клетки млекопитающих. Производство основано на системе банков клеток-продуцентов - Главного банка клеток (ГБК) и Рабочего банка клеток (РБК).
Используемые в процессе производства ИФН клетки и материалы биологического происхождения должны быть охарактеризованы в объёме и в соответствии с требованиями, изложенными в ОФС "Требования к клеточным культурам - субстратам производства биологических лекарственных препаратах" и ОФС "Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК".
Требования к испытаниям фармацевтической субстанции регламентируются нижеприведёнными показателями, требованиями ОФС "Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК".
Описание. Должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят визуально.
Подлинность. Подтверждается с помощью комплекса методов, позволяющих специфически идентифицировать ИФН с использованием стандартных образцов. Подлинность ИФН должна быть подтверждена биологическими методами по оценке специфической противовирусной активности, в реакции нейтрализации противовирусной активности ИФН моно- или поликлональными антителами против соответствующего типа ИФН, в соответствии с ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферонов с использованием культур клеток" и/или методом иммуноферментного анализа, а также на уровне структуры белка и его пространсляционных модификаций с применением физико-химических методов исследования: пептидным картированием, карбогидратным картированием (для гликозилированных белков), электрофорезом в полиакриламидном геле, изоэлектрическим фокусированием, обращенно-фазовой и эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографией, методом масс-спектрометрического анализа и др.
Выбор методов оценки подлинности должен быть обоснован. Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Для испытаний могут использоваться методы в соответствии с ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография", ОФС "Капиллярный электрофорез", ОФС "Электрофорез в полиакриламидном геле", ОФС "Изоэлектрическое фокусирование", ОФС "Определение подлинности и чистоты биологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот", ОФС "Метод иммуноферментного анализа" и другие валидированные методики, указанные в нормативной документации.
Прозрачность. Должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей".
Цветность. Должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Степень окраски жидкостей".
рН. Приводится допустимый интервал значений рН. Субстанция должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия".
Чистота субстанции оценивается комплексом обоснованных (не менее 2 - 3) взаимодополняющих методов, позволяющих охарактеризовать содержание остаточных количеств восстановленной формы ИФН, димеров и агрегатов, продуктов деградации (окисленные и дезамидированные формы).
Содержание родственных соединений и посторонних примесей в субстанции оценивают обоснованными методами. Нормативные требования и методика испытаний должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.
Остаточные белки клетки-хозяина. Содержание белков щтамма-продуцента должно соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Остаточные белки клетки-хозяина могут быть определены иммунохимическими методами (например, радиоиммунологическим или ИФА). Методика должна быть указана в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.
Остаточная ДНК штамма-продуцента. Содержание остаточных белков клеток-хозяина и ДНК штамма-продуцента не должно превышать значений, установленных в фармакопейной статье или в нормативной документации, и не превышать показателей, определенных международными требованиями.
Определение проводят методом гибридизации с зондами, меченными биотином, дигоксигенином или другой меткой. Возможно использования готовых наборов реагентов, с применением валидированной методики.
Микробиологическая чистота. Должна соответствовать требованиям, предъявляемым к фармацевтическим субстанциям, предназначенным для приготовления лекарственных форм для парентерального применения. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".
Стерильность. Субстанция должна быть стерильной, если хранится после стерилизующей фильтрации. Испытания стерильности проводят методом прямого посева или методом мембранной фильтрации в соответствии с ОФС "Стерильность".
Бактериальные эндотоксины. Указывают допустимое содержание бактериальных эндотоксинов и метод определения. Содержание бактериальных эндотоксинов должно соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Бактериальные эндотоксины".
Пирогенность (если применимо). Субстанция должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Пирогенность".
Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксична. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Аномальная токсичность", если нет других указаний в нормативной документации.
Белок. Содержание белка должно соответствовать нормам, определенным фармакопейной статьей или нормативной документацией на субстанцию. Испытания проводят любым пригодным методом, например, в соответствии с ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография", ОФС "Хроматография", ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области", ОФС "Определение белка" или в соответствии с валидированной методикой, приведённой в фармакопейной статье или нормативной документации на фармацевтическую субстанцию. Выбор метода определения белка должен быть обоснован.
Специфическая активность. Субстанция должна обладать противовирусной активностью и выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Количественное определение активности ИФН проводят с использованием биологического метода in vitro на соответствующей линии клеток, чувствительных к ИФН в соответствии с ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток".
Методика испытания должна быть приведена в фармакопейной статье или нормативной документации.
Удельная активность. Величина показателя должна соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Определяют расчетным методом как частное от деления величины специфической активности (МЕ/мл) на величину содержания белка (мг/мл).
Транспортирование, хранение. В герметичном контейнере при температуре, указанной в нормативной документации. Для замороженного раствора недопустимо повторное замораживание и оттаивание.
Лекарственные препараты на основе рекомбинантных ИФН выпускают в различных формах: капли назальные, капли глазные, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций, лиофилизат для приготовления суспензии для приема внутрь, лиофилизат в капсулах, раствор для инъекций, суппозитории, мази, гели.
Форма выпуска препарата определяет перечень показателей качества и методы их определения.
Препараты ИФН для парентерального введения широко используются в практике здравоохранения для лечения многих тяжелых вирусных заболеваний, в том числе вирусных гепатитов В, С, D, рассеянного склероза, а также большого круга онкологических заболеваний.
Препараты для местного применения (мази, суппозитории, капли и т.д.) при ряде нозологических форм способны обеспечить накопление больших концентраций препарата непосредственно в очаге поражения при отсутствии побочных эффектов, свойственных парентеральному введению высоких доз интерферона. За счет высокой концентрации в очаге инфекции достигается выраженный местный противовирусный и иммуностимулирующей эффект. Системное всасывание препаратов незначительное.
Низкая биодоступность лекарственных средств при интраназальном введении связана с функционированием особого семейства белков из 25 протеинов, входящих в состав слизистой оболочки полости носа и контролирующих транспорт всех молекулярных и клеточных объектов, проникающих через слизистую.
Лекарственные формы препаратов ИФН для ректального применения эффективны для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний урогенитального тракта, а также в составе комплексной терапии для лечения других инфекционных заболеваний вирусной этиологии. Эти препараты оказывают местное и системное действие, их биодоступность составляет более 80%. При ректальном введении отсутствуют побочные эффекты, возникающие при парентеральном введении препаратов ИФН, не образуются антитела, нейтрализующие противовирусную активность.
Препараты для местного применения и ректального применения в большинстве своем являются комбинированными и, в зависимости от состава препарата, нормативная документация должна содержать показатели, характеризующие "Подлинность" и "Количественное содержание" всех основных действующих веществ.
Требования к испытаниям лекарственных препаратов ИФН регламентируются нижеприведёнными показателями, а также требованиями ОФС "Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК" и ОФС на соответствующую лекарственную форму (ОФС "Лекарственные формы для парентерального применения", ОФС "Аэрозоли и спреи", ОФС "Глазные лекарственные формы", ОФС "Мази" и др.).
Описание. Приводится описание свойств соответствующей лекарственной формы препарата соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации.
Подлинность. Подлинность подтверждается комплексом (2-3) взаимодополняющих методов (один из которых - определение специфической активности), позволяющих специфически идентифицировать ИФН с использованием стандартных образцов. Подлинность ИФН может быть подтверждена биологическим методом в реакции нейтрализации противовирусной активности ИФН моно- или поликлональными антителами против соответствующего типа ИФН (ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток"), а также следующими физико-химическими методами: изоэлектрическим фокусированием, обращено-фазовой и эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографией и другими методами с доказанной специфичностью.
Выбор методов оценки подлинности должен быть обоснован. Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат. Для испытаний могут использоваться методы в соответствии с ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография", ОФС "Изоэлектрическое фокусирование", ОФС "Определение подлинности и чистоты биологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот", ОФС "Метод иммуноферментного анализа" и другие валидированные методики, указанные в нормативной документации.
Время восстановления препарата. (для лиофилизированных форм). Время восстановления лекарственного препарата указывается в фармакопейной статье или нормативной документации. Условия проведения испытания и методы должны быть указаны в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат.
Прозрачность. Должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей".
Цветность. Должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Степень окраски жидкостей".
рН. Приводится допустимый интервал значений рН. Лекарственный препарат должен соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия".
Извлекаемый объем (для парентеральных форм). Извлекаемый объем должен быть не менее номинального и должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье и нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС "Извлекаемый объем для лекарственных форм для парентерального применения".
Герметичность (если применимо). Лекарственный препарат должен выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Методика испытания должна быть приведена в нормативной документации.
Осмолярность (Осмоляльность) (если применимо). Лекарственный препарат должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС "Осмолярность".
При необходимости показатель "Осмолярность" может быть заменен на показатель "Осмоляльность" с приведением обоснования замены.
Механические включения. Видимые механические включения должны соответствовать требованиям, указанным в ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах".
Невидимые механические включения должны соответствовать требованиям ОФС "Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения".
Испытания проводят в соответствии с указанными ОФС.
Чистота. Родственные соединения и посторонние примеси (если применимо). Определение проводится комплексом взаимодополняющих методов (не менее 2-3), выбор которых должен быть обоснован. Требования по содержанию родственных соединений и посторонних примесей должны гарантировать безопасность и эффективность лекарственного препарата.
Содержание родственных соединений, и посторонних примесей может определяться с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях; изоэлектрофокусирования; обращено-фазовой и эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии и других методов с доказанной специфичностью и точностью.
Испытания проводят в соответствии с ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография", ОФС "Электрофорез в полиакриламидном геле", ОФС "Изоэлектрическое фокусирование".
Методики испытания должны быть приведены в нормативной документации на лекарственный препарат.
Стерильность. Лекарственный препарат должен быть стерильным. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Стерильность" методом прямого посева или мембранной фильтрации. В нормативной документации должно быть указание о наличии/ отсутствии антимикробного действия препарата в условиях проведения испытания. В случае проведения испытания методом прямого посева должны быть указаны питательные среды для проведения испытаний, соотношение количества испытуемого препарата и питательной среды, условия инкубации. Для метода мембранной фильтрации при необходимости должна быть приведена методика пробоподготовки препарата к испытанию, с указанием промывочной жидкости и количества промывок мембранного фильтра.
Бактериальные эндотоксины. Указывают допустимое содержание бактериальных эндотоксинов и методы определения. Содержание должно соответствовать нормам, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации на препарат. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Бактериальные эндотоксины".
Аномальная токсичность. Лекарственный препарат должен быть нетоксичным. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Аномальная токсичность".
Белок. Содержание белка не должно превышать значений, указанных в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография", ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области" и ОФС "Определение белка" или в соответствии с другой валидированной методикой, приведённой в фармакопейной статье или нормативной документации. Выбор метода определения белка должен быть обоснован.
Вещества, вносимые в препарат. Определяют количественное содержание веществ, используемых в качестве стабилизатора.
Полисорбаты. Определение проводится для препаратов ИФН, в состав которых входят соединения указанного класса. Содержание полисорбата должно соответствовать нормам, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации.
Содержание полисорбата может быть определено методами обращено-фазовой хроматографии, газовой хроматографии, спектрометрический метод или иной метод с доказанной специфичностью и точностью.
Методика определения, параметры пригодности системы и нормы содержания определяются типом полисорбата, входящего в состав ИФН, и используемым методом испытания.
Выбор метода определения полисорбата должен быть обоснован. Методика должна быть приведена в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат.
Специфическая активность. Лекарственный препарат должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации.
Количественное определение активности ИФН проводят с использованием биологического метода in vitro на соответствующей линии клеток, чувствительных к интерферону, в соответствии с ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток", если в фармакопейной статье или нормативной документации не указано иное.
Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств" и ОФС для соответствующей лекарственной формы препарата (ОФС "Лекарственные формы для парентерального применения" и др.).
Транспортирование, хранение. В защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°С, не допускается замораживание в соответствии с ОФС "Лекарственные формы для парентерального применения" и ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств". Контролируемые условия указывают в фармакопейной статье или нормативной документации.