Настоящая фармакопейная статья распространяется на интерферон человеческий лейкоцитарный, представляющий собой группу белков (интерфероны альфа-типа), синтезируемых лейкоцитами, которые получены из крови клинически здоровых доноров в ответ на воздействие вируса-индуктора интерферона (вирус болезни Ньюкасла или вирус Сендай).

Основными характеристиками интерферона человеческого лейкоцитарного являются:

- универсальность (активен против большинства ДНК- и РНК-содержащих вирусов);

- выраженная видоспецифичность;

- последействие (после удаления вируса в обработанных клетках сохраняется способность подавлять размножение вируса);

- нечувствительность к антителам против вирусов, индуцирующих их образование.

Производство

Характеристика производственных штаммов

Для производства интерферона лейкоцитарного человеческого в качестве интерфероногена используют вирус болезни Ньюкасла (NDV) или вирус парагриппа Сендай, депонированные в национальной или международной коллекции.

Вирус болезни Ньюкасла не должен быть контаминирован бактериями (в том числе микоплазмами) и посторонними вирусами. Инфекционная активность NDV должна быть не менее 10⁸ ТЦД₅₀/мл, титр гемагтлютининов - не менее 1:128 ГАЕ/мл при использовании штамма "Н" вируса болезни Ньюкасла и не менее 1:256 ГАЕ/мл при использовании ts-мутанта штамма "Н" вируса болезни Ньюкасла.

Вирус болезни Ньюкасла должен оказывать цитопатическое действие на 3-суточную культуру куриных фибробластов; репродуцироваться в 9-11-суточных куриных эмбрионах при температуре ; для ts-мутанта штамма "Н" вируса болезни Ньюкасла - при температуре  в течение 48 ч.

Вирус Сендай не должен быть контаминирован бактериями (в том числе микоплазмами) и посторонними вирусами; титр гемагглютининов должен быть не менее 1:16000 ГАЕ/мл при отсутствии цитопатического действия; должен репродуцироваться в 10-11 суточных куриных эмбрионах при температуре  в течение 72 ч.

Требования к донорской крови определяются в соответствии с национальными требованиями, включая:

- стерильность, хранение при температуре от 2 до 8° С не более 48 ч с момента забора;

- количество жизнеспособных лейкоцитов при подсчете должно быть не менее 70%.

Требовании к куриным эмбрионам определяются в соответствии с национальными требованиями, включая:

- эмбрионы должны быть получены от здоровых кур из благополучных в эпизоотическом отношении птицеводческих хозяйств, при отсутствии заболеваемости кур туберкулезом, оспой и другими инфекциями птиц; возраст эмбрионов при использовании вируса болезни Ньюкасла - 9-11 сут; при использовании вируса Сендай - 10-11 сут; сеть кровеносных сосудов при овоскопии должна быть хорошо развита;

- хранение и транспортировка оплодотворенного яйца до инкубации осуществляется согласно ОСТ Стандарт отрасли "Яйца инкубационные. Технические условия";

- аллантоисная вируссодержащая жидкость и главный посевной материал (лиофилизированная аллантоисная вируссодержащая жидкость) не должны быть контаминированы бактериями (в том числе микоплазмами). Инфекционная активность должна быть не менее 10⁸ ТЦД₅₀/мл.

Питательные среды

Производственные питательные среды не должны содержать компонентов, вызывающих аллергические или иные нежелательные реакции у человека. Сырье, реактивы и реагенты, используемые при производстве питательных сред, должны быть подтверждены сертификатами (паспортами) качества. Питательные среды должны быть стерильными.

Основные стадии производства и контроля интерферона:

- получение вируса-индуктора (контрольные параметры (КП) - стерильность; гемагглютипируюшая активность вируса);

- получение "чистых" лейкоцитов (КП - стерильность; отсутствие поверхностного антигена вируса гепатита В; отсутствие антител к вирусу гепатита С, вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1, ВИЧ-2) и возбудителю сифилиса; отсутствие нуклеиновых кислот вирусов гепатита В и С, ВИЧ и других вирусов в соответствии с национальными требованиями; количество жизнеспособных лейкоцитов; обьем загрузки в реактор или общий объем в бутылях при роллерном культивировании лейкоцитов);

- индукция интерфероногенеза и биосинтез интерферона (КП - гемагглютинирующая активность вируса-индуктора; температура в реакторе или в термокомнате; время прохождения стадии; скорость вращения центрифуги; рН);

- очистка полуфабриката интерферона (КП - температура и давление внутри емкости с полуфабрикатом при культивировании в реакторе: стерильность; специфическая активность; специфическая безопасность; рН);

- розлив (КП - номинальный объем; визуальный осмотр; стерильность);

- сублимационное высушивание - для лиофилизированных форм (КП - температура полок и время замораживания);

- контроль препарата в первичной упаковке;

- упаковка, маркировка (КП - соответствие упаковки и маркировки).

Перечень показателей качества различных лекарственных форм препаратов интерферона и требования к ним приводятся в нормативной документации.

Испытания

Описание. Приводят описание физических свойств соответствующей лекарственной формы лекарственного средства.

Подлинность. Должен представлять собой интерферон альфа-типа. Определение проводят в соответствии с ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием клеточных культур".

Специфическая активность. Значение показателя должно соответствовать требованиям нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток".

Овальбумин. Содержание овальбумина должно быть не более 0,05 мкг/мл. Определение проводят методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-систем в соответствии с ОФС "Метод иммуноферментного анализа".

Время растворения (для лиофилизированных форм). Не более 3 мин, если нет других указаний в нормативной документации. В ампулу вносят 2 мл растворителя, предусмотренного требованиями нормативной документации. Наблюдают визуально процесс растворения, время полного растворения определяют с помощью секундомера.

Извлекаемый объем (для жидких форм). Не менее номинального. Определяют в соответствии с ОФС "Извлекаемый объём лекарственных форм для парентерального применения".

Цветность. Должен соответствовать требованиям нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС "Степень окраски жидкостей".

Прозрачность. Должен выдерживать сравнение с эталоном II. Определение проводят в соответствии с ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей".

Механические включения (для инъекционных форм). Должны соответствовать требованиям ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах" и ОФС "Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения".

рН. Допустимый интервал значений должен соответствовать требованиям нормативной документации. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия". В случае определения рH после растворения следует указать растворитель и его объем.

Потеря в массе при высушивании (для лиофилизированных форм). Значение показателя не должно превышать 3,5%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Потеря в массе при высушивании".

Белок. Содержание белка должно соответствовать требованиям нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение белка" методом с биуретовым реактивом или в соответствии с ОФС "Определение белка колориметрическим методом (метод Лоури) в иммунобиологических лекарственных препаратах" (метод А без предварительного осаждения белка).

Стерильность. Препарат должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС "Стерильность".

Микоплазмы. Должны отсутствовать. Определение проводят в соответствии с ОФС "Испытание на присутствие микоплазм".

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным. Определение проводят по ОФС "Аномальная токсичность".

Токсичность. Препарат не должен оказывать токсического действия на культуру клеток.

Для определения токсичности препарата используют однослойные перевиваемые или диплоидные клеточные культуры, чувствительные к данному типу интерферона и применяемые для определения его специфической активности. Клетки выращивают способом, предусмотренным для данного вида (так же, как и для определения специфической активности). В лунки с 1-3-суточным монослоем вносят по 0,1 мл препарата интерферона в разведении, указанном в нормативной документации для каждого конкретного препарата. В лунки с контрольной культурой вносят поддерживающую среду без препарата интерферона. Культуры выдерживают в течение 24-48 ч при температуре  в атмосфере с  CO₂, после чего просматривают под микроскопом. Клеточный монослой должен оставаться неповрежденным, без признаков дегенерации и не отличаться от контрольных проб.

Специфическая безопасность. Препарат не должен содержать живого вируса-индуктора интерферона. Испытание на полноту инактивации вируса-индуктора проводят одним из 2 методов: с использованием 9-11-суточных куриных эмбрионов или культуры клеток куриных фибробластов.

1. Испытание на куриных эмбрионах. Испытуемый препарат вводят по 0,2 мл в аллантоисную полость 9-11 суточных эмбрионов (не менее 5). Инкубируют при температуре  в течение 48 ч (при использовании в качестве индуктора интерферона вируса болезни Ньюкасла) или в течение 72 ч (при использовании вируса Сендай). После инкубации эмбрионы должны оставаться жизнеспособными. Отдельно из каждого эмбриона отсасывают аллантоисную жидкость и проверяют ее в реакции гемагглютинации. Для этого в лунки планшетов для серологических реакций вносят по 0,5 мл аллантоисной жидкости. Затем в каждую лунку добавляют равный объем 0,5% суспензии куриных эритроцитов в 0,9% растворе натрия хлорида или в буферном растворе. Результаты учитывают визуально через 20-30 мин после оседания эритроцитов. Гемагглютинация во всех проверяемых образцах должна отсутствовать. При гибели хотя бы 1 эмбриона или наличии гемагглютинации хотя бы в 1 пробе испытание повторяют на удвоенном количестве эмбрионов. В случае повторной гибели эмбрионов или выявлении гемагглютинации препарат считают не прошедшим испытание.

2. Испытание на фибробластах куриных эмбрионов. Испытание на фибробластах куриных эмбрионов проводят в однослойной культуре клеток, выращенной в лунках 96-луночного плоскодонного планшета на питательной среде 199 или Игла-MEM, содержащей 5-10% сыворотки крови крупного рогатого скота, 100 ед/мл бензилпенициллина натриевой соли и 100 мкг/мл гентамицина сульфата или канамицина сульфата. Посевная доза - не менее 5·10⁴ кл/0,1 мл на лунку. Планшеты с культурой клеток инкубируют 3-4 сут при температуре  в атмосфере 5% CO₂ при влажности . Среду сливают и в лунки планшетов вносят по 0,1 мл испытуемого препарата интерферона в разведении 1:5 в питательной среде 199 или Игла-MEM. На каждый образец препарата используют не менее 4 лунок. В такое же количество лунок с контрольной культурой клеток вносят питательную среду без препарата. Учет проводят под микроскопом при 100-кратном увеличении через 48-72 ч инкубации. Монослой клеток должен оставаться неповрежденным, цитопатическое действие должно отсутствовать. При наличии дегенерации культуры клеток испытание повторяют. При повторном выявлении цитопатического действия испытуемого препарата и в отсутствие цитоматического эффекта в контрольных лунках препарат считают не прошедшим испытание.

Поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg). Препарат не должен содержать поверхностного антигена вируса гепатита В. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения Российской Федерации и имеющих чувствительность не ниже 0,1 нг/мл.

Антитела к вирусу гепатита С. Антитела к вирусу гепатита С должны отсутствовать. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения Российской Федерации и имеющих 100% чувствительность и специфичность, в соответствии с инструкциями по применению.

Антитела к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2). Препарат не должен содержать антитела к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2). Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения Российской Федерации и имеющих чувствительность и специфичность не ниже 100%.

Маркировка и упаковка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты".

На вторичную (потребительскую) упаковку лекарственных средств должна наноситься надпись: "Антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, к вирусу гепатита С и поверхностный антиген вируса гепатита В отсутствуют".

Транспортирование и хранение. При температуре от 2 до 8°С, если в нормативной документации нет других указаний. Не замораживать.