Собранные в период цветения, высушенные и обмолоченные цветки и бутоны дикорастущего и культивируемого кустарника бузины черной - Sambucus nigra L., сем. бузиновых - Sambucaceae (жимолостных - Caprifoliacеае).

Подлинность

Внешние признаки. Цельное сырье. Смесь отдельных цветков, бутонов на коротких голых цветоножках длиной до 2-3 мм и без них, частей соцветий. Цветки с пятизубчатой спайнолепестной чашечкой и венчиком из 4-5 лепестков, сросшихся у основания, диаметром до 8 мм. Диаметр бутонов - до 3 мм. Лепестки венчика широко-яйцевидные, почти округлые. Чашелистики треугольные, эллиптические или яйцевидные желтовато-зеленого цвета. Тычинок 5, приросших к трубке венчика, завязь почти шаровидная короткая полунижняя, трехгнездная. Цвет желтоватый или желтый. Запах специфический ароматный. Вкус водного извлечения пряный.

Измельченное сырье. При рассмотрении измельченного сырья под лупой или стереомикроскопом видны отдельные цельные цветки, бутоны на коротких голых цветоножках и без них, части цветков, бутонов и цветоножек, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм.

Цвет желтоватый или желтый с беловато- или зеленовато-серыми вкраплениями. Запах специфический, ароматный. Вкус водного извлечения пряный.

Порошок. При рассмотрении измельченного сырья под лупой или стереомикроскопом видна смесь частиц цветков, бутонов и цветоножек, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Цвет желтоватый или желтый. Запах специфический, ароматный. Вкус водного извлечения пряный.

Микроскопические признаки. Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении лепестка с поверхности должны быть видны многоугольные со слабоизвилистыми тонкими стенками клетки верхнего эпидермиса по краю с сосочковидными выростами; эпидермис нижней стороны лепестка характеризуется более крупными клетками с сильноизвилистыми стенками. Клетки эпидермиса по краю с сосочковидными выростами. Устьица только на нижней стороне лепестка, округлые, аномоцитного типа. Кутикула с обеих сторон лепестка морщинистая. Редко с нижней стороны лепестка (у его основания) могут встречаться простые и железистые волоски. Простые волоски одноклеточные, тонкостенные, со штриховатой кутикулой. Железистые волоски крупные с одно- и многоклеточной округлой или овальной головкой, различной формы нa одно- и многоклеточной ножке.

Клетки верхнего эпидермиса чашелистика слегка вытянуты, с тонкими слабоизвилистыми стенками. Клетки эпидермиса с нижней стороны чашелистика более крупные, слегка вытянуты, с извилистыми тонкими стенками. Кутикула с обеих сторон морщинистая. Устьица расположены в основном с нижней стороны, округлые, аномоцитного типа. С верхней и нижней стороны чашелистика имеются сосочковидные выросты, особенно много их по краю. С нижней стороны чашелистика встречаются простые и железистые волоски. Простые волоски одноклеточные, тонкостенные, со штриховатой кутикулой. Железистые волоски крупные с одно- и многоклеточной головкой, различной формы на одно- и многоклеточной ножке. Пыльца трехбороздная, эллипсоидальная, гладкая.

Эпидермис цветоножки представлен вытянутыми прямоугольными клетками с ровными стенками, с овальными устьицами и нередко с сосочковидными выростами. Эпидермис цветоножки у основания цветка обильно покрыт головчатыми и простыми волосками.

Порошок. При рассмотрении микропрепаратов должны быть видны: фрагменты эпидермиса лепестка с многоугольными слабоизвилистыми стеками клеток и сосочковидными выростами; фрагменты эпидермиса лепестка с сильноизвилистыми стенками клеток и округлыми устьицами, фрагменты эпидермиса чашелистика со слабоизвилистыми стенками клеток и округлыми устьицами; на эпидермисе лепестка и чашелистика видна складчатость кутикулы; отдельные простые и одноклеточные волоски с тонкими стенками и штриховатой кутикулой и головчатые волоски - крупные, с округлой или овальной одно- и многоклеточной головкой на одно- и многоклеточной ножке или фрагменты волосков; фрагменты. эпидермиса цветоножки с прямоугольными клетками с ровными стенками, с овальными устьицами, сосочковидными выростами, могут быть с простыми и головчатыми волосками; трехбороздная эллипсоидальная гладкая пыльца.

Определение основных групп биологически активных веществ

1. Тонкослойная хроматография

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля на алюминиевой подложке размером см наносят 50 мкл испытуемого раствора (см. раздел "Количественное определение" приготовление раствора А испытуемого раствора), рядом наносят 50 мкл раствора стандартного образца (СО) рутина (см. раздел "Количественное определение" приготовление раствора А СО рутина). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру, предварительно насыщенную смесью растворителей этилацетат метанол вода (77:12:11), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

На хроматограмме испытуемого раствора в УФ-свете при длине волны 254 нм должны обнаруживаться 2 зоны адсорбции синего цвета ниже зоны адсорбции на хроматограмме раствора СО рутина и 2 зоны адсорбции синего цвета выше зоны рутина.

Затем пластинку обрабатывают алюминия хлорида спиртовым раствором 2%, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100°С в течение 2-3 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 им.

На хроматограмме испытуемого раствора в УФ-свете при длине волны 365 нм должны обнаруживаться 2 зоны адсорбции с флуоресценцией ярко-желтого цвета ниже зоны адсорбции на хроматограмме раствора СО рутина и 2 зоны адсорбции с флуоресценцией ярко-желтого цвета выше зоны рутина (флавоноиды).

2. Аналитическую пробу сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, в количестве 1,0 г помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл спирта 50% и нагревают на водяной бане при температуре 60°С в течение 15 мин. Затем извлечение охлаждают до комнатной температуры, фильтруют через бумажный фильтр и упаривают до 1 мл. К полученному извлечению прибавляют 1 мл спирта 96%, 0,1 г порошка магния и 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной; постепенно появляется розово-красное окрашивание (флавоноиды).

Испытания

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 14%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок не более 10%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 2%.

Измельченность сырья. Цельное сырье: измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, - не более 5%. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, - не более 5%; измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, - не более 5%. Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, - не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, - не более 5%.

Посторонние примеси

Цветки, изменившие окраску. Цельное сырье, измельченное сырье не более 8%.

Другие части растения (цветоносы, веточки, листья). Цельное сырье, измельченное сырье - не более 10%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 1%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 1%.

Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок; сумма флавоноидов в пересчете на рутин - не менее 2%; экстрактивных веществ, извлекаемых водой, - не менее 30%.

Сумма флавоноидов

Приготовление растворов.

Раствор СО рутина. Около 0,05 г (точная навеска) СО рутина, высушенного в течение 3 ч при температуре 130-135°С, растворяют при нагревании в спирте 70% в мерной колбе вместимостью 50 мл. После охлаждения до комнатной температуры доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор А СО рутина). Срок годности раствора 30 сут при хранении в прохладном защищенном от света месте.

1,0 мл раствора А СО рутина, 10 мл спирта 96%, 0,5 мл уксусной кислоты раствора 30%, 1,5 мл алюминия хлорида раствора 10%, помещенных в мерную колбу вместимостью 25 мл и доведенных водой до метки (раствор Б СО рутина). Срок годности раствора 30 сут при хранении в прохладном защищенном от света месте.

Алюминия хлорида раствор 10%. 10,0 г алюминия хлорида безводного или 18,0 г алюминия хлорида 6-водного растворяют в 80 мл воды, фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки. Срок годности раствора 3 мес.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 60 мл спирта 70%, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 мин. После охлаждения до комнатной температуры содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл, чтобы частицы сырья не попали на фильтр. В круглодонную колбу со шлифом прибавляют 45 мл спирта 70%, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры извлечение фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу, доводят объем раствора в колбе спиртом 70% до метки и тщательно перемешивают (раствор A испытуемого раствора).

5,0 мл раствора А испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор Б испытуемого раствора).

5,0 мл раствора Б испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 10 мл спирта 96%, 0,5 мл уксусной кислоты раствора 30%, 1,5 мл алюминия хлорида раствора 10%, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и тщательно перемешивают (раствор В испытуемого раствора).

Оптическую плотность раствора В испытуемого раствора измеряют через 30 мин на спектрофотометре при длине волны 408 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 5 мл раствора Б испытуемого раствора, 10 мл спирта 96%, 0,5 мл уксусной кислоты раствора 30%, доведенный спиртом 70% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б СО рутина. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл раствора А СО рутина, 10 мл спирта 96%, 0,5 мл уксусной кислоты раствора 30%, доведенный спиртом 70% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в абсолютно сухом сырье в процентах в (X) вычисляют по формуле:

,

где А - оптическая плотность раствора В испытуемого раствора;

A₀ - оптическая плотность раствора Б СО рутина;

а - навеска сырья, г;

a₀ - навеска СО рутина, г;

Р - содержание основного вещества в СО рутина, %;

W - влажность сырья, %.

Допускается содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин вычислять с использованием удельного показателя поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом по формуле:

,

где А - оптическая плотность раствор В испытуемого раствора:

- удельный показатель поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом при длине волны 408 нм, равный 248;

а - навеска сырья, г;

W - влажность сырья, %.

Экстрактивные вещества. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах" (метод 1, навеска сырья 1,0 г, экстрагент - вода).

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС "Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".