ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Колистиметат натрия получают из колистина под действием формальдегида и гидросульфита натрия с образованием смеси от ди- до пентабиссульфометилированных производных первичных аминов, в основном полимиксинов E1 и E2.

Полусинтетический продукт, получаемый в процессе ферментации.

Содержание: не менее 11 500 МЕ/мг в пересчёте на сухую субстанцию.

ПРОИЗВОДСТВО

Состав и чистота используемого сырья в производстве субстанции должны соответствовать определённым требованиям: содержание полимиксина E1 – от 50 % до 75 % и полимиксина E2 – от 5 % до 20 %.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый порошок.

Гигроскопичен.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, мало растворим в этаноле 96 %, практически нерастворим в ацетоне.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

А. Жидкостная хроматография. Используют хроматограммы, полученные в испытании «Компонентный состав».

Требование: пики CMS E1ASM8, CMS E1ASM6, CMS E1ASM4, CMS E2ASM8, CMS E2ASM6 и CMS E2ASM4 на хроматограмме испытуемого раствора должны соответствовать по времени удерживания соответствующим пикам на хроматограмме раствора сравнения (a).

Б. Качественная реакция. В 0,5 мл воды растворяют испытуемый образец таким образом, чтобы раствор содержал 2 мг ионов натрия. Прибавляют 1,5 мл метоксифенилуксусной кислоты реактива и охлаждают на ледяной бане в течение 30 мин. Образуется белый кристаллический осадок, его помещают в воду и перемешивают в течение 5 мин; осадок не должен раствориться. Прибавляют 1 мл аммиака раствора 10 %, осадок должен полностью раствориться. Прибавляют 1 мл аммония карбоната раствора 15,8 %; осадок не должен образовываться.

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность раствора (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»). 0,16 г испытуемого образца растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до 10 мл. Полученный раствор должен быть прозрачным.

pH (ОФС «Ионометрия», метод 3). От 6,5 до 8,5.

0,1 г испытуемого образца растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до 10 мл. Определение проводят через 30 мин.

Свободный колистин. 80 мг испытуемого образца растворяют в 3 мл воды, прибавляют 0,1 мл раствора 100 г/л кремневольфрамовой кислоты; через 10–20 сек после прибавления реактива опалесценция полученного раствора не должна превышать эталон сравнения II (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Компонентный состав. Метод ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Буферный раствор. Раствор 7,8 г/л натрия дигидрофосфата доводят pH натрия гидроксида раствором 1 М до 6,5.

Испытуемый раствор. 20 мг испытуемого образца растворяют в 0,5 мл воды и доводят объём раствора метанолом до 10 мл.

Раствор сравнения (а). 10 мг фармакопейного стандартного образца колистиметата натрия для идентификации пика растворяют в 0,25 мл воды и доводят объём раствора метанолом до 5,0 мл.

Раствор сравнения (б). 2 мг фармакопейного стандартного образца E1 колистиметата натрия для идентификации пика растворяют в 0,25 мл воды и доводят объём раствора метанолом до 2,0 мл.

Раствор сравнения (в). 1,5 мг фармакопейного стандартного образца E2 колистиметата натрия для идентификации пика растворяют в 0,25 мл воды и доводят объём раствора метанолом до 5,0 мл.

Раствор сравнения (г). 1,5 мл испытуемого раствора доводят метанолом до 25,0 мл.

Условия хроматографирования:

- предколонка: длиной 5 мм и внутренним диаметром 2,1 мм; заполненная этилен-связанным силикагелем октадецилсилильным для хроматографии с размером частиц 1,7 мкм;

- колонка: длиной 0,15 м и внутренним диаметром 2,1 мм; заполненная этилен-связанным силикагелем октадецилсилильным для хроматографии с размером частиц 1,7 мкм;

- температура колонки: 30 °С;

- подвижные фазы:

- подвижная фаза А: ацетонитрил для хроматографии особо чистый – буферный раствор (5:95 об/об);

- подвижная фаза Б: ацетонитрил для хроматографии особо чистый – буферный раствор (50:50 об/об);

- режим градиентного элюирования:

- скорость потока подвижной фазы: 0,30 мл/мин;

- детектор: спектрофотометрический; длина волны, 210 нм;

- температура автоматического пробоотборника: 5 °С;

- вводимый объём пробы: по 2 мкл;

Идентификация компонентов: для идентификации пиков компонентов CMS E1ASM8, CMS E1ASM6, CMS E1ASM4, CMS E2ASM8, CMS E2ASM6 и CMS E2ASM4 используют хроматограмму раствора сравнения (а) и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу колистиметата натрия для идентификации пиков, и относительное время удерживания соединений.

Пик, соответствующий наиболее избыточному компоненту в диапазоне 11,0–14,5 мин (CMS E1ASM6) на хроматограмме раствора сравнения (a), устанавливают в качестве основного пика (относительное время удерживания 1,00).

Для идентификации пиков компонентов CMS E1 и CMS E2 используют хроматограммы растворов сравнения (б) и (в) и хроматограммы, прилагаемые к фармакопейным стандартным образцам E1 колистиметата натрия для идентификации пика и E2 колистиметата натрия для идентификации пика. Для идентификации всех пиков компонентов CMS E1 и CMS E2 используют хроматограмму испытуемого раствора.

Относительное время удерживания (время удерживания CMS E1ASM6 – около 13 мин): CMS E2ASM8 – около 0,22; CMS E1ASM8 – около 0,39; CMS E2ASM6 – около 0,71; CMS E2ASM4 – около 1,77; CMS E1ASM4 – около 2,35.

Пригодность хроматографической системы:

- расхождение времени удерживания CMS E1ASM6
в 2 последовательных введениях раствора сравнения (a) составляет
менее 0,1 мин; отклонение времени удерживания компонента CMS E1ASM6 от начала до конца испытания составляет менее 0,5 мин;

- отношение сигнал/шум (S/N): не менее 50 для пика компонента CMS E1ASM6 на хроматограмме раствора сравнения (г);

- число теоретических тарелок: не менее 50 000 для пика компонента CMS E1ASM6 на хроматограмме раствора сравнения (а);

- отношение максимум/минимум (p/v): не менее 1,2, где H_p – высота пика над базовой линией с относительным временем удерживания около 2,37 и H_v – высота над базовой линией наиболее низкой точки кривой, разделяющей данный пик от пика CMS E1ASM4 на хроматограмме раствора сравнения (а).

Содержание каждого компонента CMS E1ASM8, CMS E1ASM6, CMS E1ASM4, CMS E2ASM8, CMS E2ASM6 и CMS E2ASM4 в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»).

Пределы содержания компонентов:

- CMS E1ASM8: от 5,0 % до 9,5 %;

- CMS E1ASM6: от 6,5 % до 9,5 %;

- CMS E1ASM4: от 2,0 % до 5,0 %;

- CMS E2ASM8: от 0,5 % до 2,0 %;

- CMS E2ASM6: от 0,5 % до 2,5 %;

- CMS E2ASM4: не более 1,5 %;

- сумма пиков компонентов CMS E1 и CMS E2 с площадью более 0,50 %: не менее 77,0 %;

- неучитываемый предел: 0,05 %.

Родственные примеси. Метод ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография») в условиях, описанных в испытании «Компонентный состав».

Содержание родственных примесей вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»).

Пределы содержания примесей:

- любые примеси (любой пик с площадью более 0,50 %, не относящийся к CMS E1 и CMS E2): для каждой примеси, не более 1,5 %;

- сумма примесей (сумма всех пиков с площадью более 0,50 %, не относящихся к CMS E1 и CMS E2): не более 5,5 %;

- неучитываемый предел: 0,05 %.

Остаточные органические растворители (ОФС «Остаточные органические растворители»).

Потеря в массе при высушивании (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 3). Не более 5,0 %.

1,000 г испытуемого образца высушивают в вакууме при давлении не более 0,7 кПа, при температуре 60 °С в течение 3 ч.

Сульфатная зола (ОФС «Сульфатная зола»). От 16 % до 21 %.

Определение проводят с использованием 0,5 г испытуемого образца.

Микробиологическая чистота. Испытуемый образец должен выдерживать требования испытания на микробиологическую чистоту.

Испытание проводят для нестерильных субстанций.

Стерильность (ОФС «Стерильность»). Испытуемый образец должен выдерживать требования испытания на стерильность.

Испытание проводят для стерильных субстанций.

Пирогенность (ОФС «Пирогенность»). Вводят 1,0 мл раствора, содержащего 2,5 мг/мл испытуемого образца в воде для инъекций, на 1 кг массы животного. Если субстанция предназначена для производства лекарственных препаратов для парентерального применения без последующего удаления пирогенов, то испытуемый образец должен выдерживать требования испытания на пирогенность.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Микробиологический метод (ОФС «Определение антимикробной активности антибиотиков»).

ХРАНЕНИЕ

В воздухонепроницаемой упаковке, в защищённом от света месте.

Если субстанция стерильная, её хранят в стерильной герметичной упаковке с контролем первого вскрытия.