Фрамицетина сульфат

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

2-Дезокси-4-O-(2,6-диамино-2,6-дидезокси-a-D-глюкопиранозил)-5-O-[3-O-(2,6-диамино-2,6-дидезокси-b-L-идопиранозил)-b-D-рибофуранозил]-D-стрептамина (неомицина B) сульфат.

Субстанция, продуцируемая определёнными штаммами Streptomyces fradiae или Streptomyces decaris или полученная любым другим способом.

Содержание: не менее 630 МЕ/мг в пересчёте на сухую субстанцию.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или желтовато-белый порошок.

Гигроскопичен.

Растворимость. Легко растворим в воде, очень мало растворим в этаноле 96 % и практически нерастворим в ацетоне.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

А. Жидкостная хроматография. Используют хроматограммы, полученные в испытании «Родственные примеси».

Требования:

- на хроматограмме испытуемого раствора время удерживания основного пика должно соответствовать времени удерживания основного пика на хроматограмме раствора сравнения (а);

- соответствует пределу, установленному для примеси C.

Б. Качественная реакция

Испытуемый образец даёт реакцию на сульфаты (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

ИСПЫТАНИЯ

pH (ОФС «Ионометрия», метод 3). От 6,0 до 7,0.

0,1 г испытуемого образца растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до 10 мл.

Удельное оптическое вращение (ОФС «Оптическое вращение»). От + 52,5 до + 55,5 в пересчёте на сухую субстанцию.

1,00 г испытуемого образца растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до 10,0 мл.

Родственные примеси. Метод ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Испытуемый раствор. 25,0 мг испытуемого образца растворяют в подвижной фазе и доводят объём раствора подвижной фазой до 50,0 мл.

Раствор сравнения (а). Содержимое флакона с фармакопейным стандартным образцом фрамицетина сульфата растворяют в подвижной фазе до получения раствора с концентрацией 0,5 мг/мл.

Раствор сравнения (б). 3,0 мл раствора сравнения (а) доводят подвижной фазой до объёма 100,0 мл.

Раствор сравнения (в). 1,0 мл раствора сравнения (а) доводят подвижной фазой до объёма 100,0 мл.

Раствор сравнения (г). Содержимое флакона с фармакопейным стандартным образцом неамина (соответствует 0,5 мг) растворяют в подвижной фазе и доводят объём раствора подвижной фазой до 100,0 мл.

Раствор сравнения (д). 10 мг фармакопейного стандартного образца неомицина сульфата растворяют в подвижной фазе и доводят объём раствора подвижной фазой до 100,0 мл.

Примечание

Примесь A (неамин или неомицин A-LP): 2-дезокси-4-O-(2,6-диамино-2,6-дидезокси-a-D-глюкопиранозил)-D-стрептамин.

Примесь C (неомицин С): 2-дезокси-4-O-(2,6-диамино-2,6-дидезокси-a-D-глюкопиранозил)-5-O-[3-O-(2,6-диамино-2,6-дидезокси-α-D-глюкопиранозил)-b-D-рибофуранозил]-D-стрептамин.

Примесь G (неомицин B-LP): 3-N-ацетил-2-дезокси-4-O-(2,6-диамино-2,6-дидезокси-a-D-глюкопиранозил)-5-O-[3-O-(2,6-диамино-2,6-дидезокси-b-L-идопиранозил)-b-D-рибофуранозил]-D-стрептамин.

Условия хроматографирования:

- колонка: длиной 0,25 м и внутренним диаметром 4,6 мм; заполненная силикагелем октадецилсилильным, деактивированным по отношению к основаниям, для хроматографии с размером частиц 5 мкм;

- температура колонки: 25 °С;

- подвижная фаза: смешивают 20,0 мл трифторуксусной кислоты, 6,0 мл натрия гидроксида раствора насыщенного, свободного от карбонатов и 500 мл воды, доводят объём раствора водой до 1000,0 мл и дегазируют;

- скорость потока подвижной фазы: 0,7 мл/мин;

- постколоночный реактив: натрия гидроксида раствор насыщенный, свободный от карбонатов дегазируют и разбавляют 1 к 25. Реактив добавляют импульсно в сток колонки, используя полимерный змеевик объёмом 375 мкл;

- скорость потока постколоночного реактива: 0,5 мл/мин;

- детектор: импульсный амперометрический или аналогичный с золотым индикаторным электродом, хлорсеребряным электродом сравнения и вспомогательным электродом из нержавеющей стали, который представляет собой корпус ячейки, поддерживаемый при напряжении 0,00 В для детектирования, +0,80 В для окисления и –0,60 В для восстановления с длительностью импульсов в соответствии с используемым прибором.

- вводимый объём пробы: 10 мкл;

- время хроматографирования: должно в 1,5 раза превышать время удерживания неомицина B.

Относительное время удерживания (время удерживания неомицина B – около 10 мин): примесь A – около 0,65; примесь C – около 0,9; примесь G – около 1,1.

Пригодность хроматографической системы:

- разрешение (R_S): не менее 2,0 между пиками примеси C и неомицином B на хроматограмме раствора сравнения (д); при необходимости изменяют объём натрия гидроксида раствора насыщенного, свободного от карбонатов в подвижной фазе;

- отношение сигнал/шум (S/N): не менее 10 для основного пика на хроматограмме раствора сравнения (в).

Пределы содержания примесей:

- примесь A: не более площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (г), с учётом содержания фармакопейного стандартного образца неамина (1,0 %);

- примесь C: не более площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (б) (3,0 %);

- сумма любых примесей: не более площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (б) (3,0 %);

- неучитываемый предел: площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (в) (1,0 %).

Остаточные органические растворители (ОФС «Остаточные органические растворители»).

Сульфаты. От 27,0 % до 31,0 % в пересчёте на сухую субстанцию. 0,250 г испытуемого образца растворяют в 100 мл воды и при помощи аммиака раствора концентрированного 25%, доводят значение рН до 11, прибавляют 10,0 мл 0,1 М раствора бария хлорида и 0,5 мг фталеинового пурпурного, титруют 0,1 М раствором натрия эдетата, прибавив 50 мл этанола 96 %, когда окраска раствора начнёт изменяться, продолжают титровать до исчезновения фиолетово-синей окраски.

1 мл 0,1 М раствора бария хлорида эквивалентен 9,606 мг SO₄.

Необходимость включения показателя зависит от способа получения субстанции.

Потеря в массе при высушивании (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 3). Не более 8,0 %. 1,000 г испытуемого образца высушивают в вакууме при давлении не более 0,7 кПа и температуре 60 °С в течение 3 ч.

Сульфатная зола (ОФС «Сульфатная зола»). Не более 1,0 %.

Определение проводят с использованием 1,0 г испытуемого образца.

Микробиологическая чистота. Испытуемый образец должен выдерживать требования испытания на микробиологическую чистоту.

Испытание проводят для нестерильных субстанций.

Стерильность (ОФС «Стерильность»). Испытуемый образец должен выдерживать требования испытания на стерильность.

Испытание проводят для стерильных субстанций.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Микробиологический метод (ОФС «Определение антимикробной активности антибиотиков»).

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке, в защищённом от света месте.

Если субстанция стерильная, её хранят в стерильной герметичной упаковке с контролем первого вскрытия.