Черники обыкновенной побеги

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Собранные до окончания плодоношения и высушенные верхушки побегов многолетнего дикорастущего кустарника черники обыкновенной - Vaccinium myrtillus L., сем. вересковых - Еricaceae.

Содержит:

- не менее 3,5 % дубильных веществ в пересчёте на сухое сырьё;

- не менее 0,7 % суммы флавоноидов в пересчёте на гиперозид в сухом сырье.

Подлинность

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Травы».

Цельное сырье. Цельные или частично измельчённые верхушки побегов длиной не более 150 мм, отдельные листья и стебли (веточки), изредка бутоны, цветки и плоды. Листья очередные, голые, короткочерешковые, тонкие, хрупкие, блестящие, с перистым жилкованием, яйцевидные или эллиптические, в основании округлые или слабосердцевидные, на верхушке острые, иногда притупленные, с мягким шипиком, по краю мелкопильчатые, длиной до 30 мм, шириной до 20 мм. Стебли простые или ветвистые, остроребристые, голые. Цветки (бутоны), одиночные поникающие, расположены в пазухах листьев; венчик зеленовато-белый с красноватым оттенком, кувшинчато-шаровидный с 4-5 зубчиками, чашечка без зубчиков, тычинок 8-10. Плоды - ягоды, бесформенные, морщинистые, диаметром до 6 мм. На верхушке виден остаток чашечки, которая окружает вздутый диск.

Цвет листьев и стеблей светло-зелёный, зелёный, коричневато-зелёный; плодов - чёрный, светло - или тёмно-коричневый. Запах слабый характерный.

Измельчённое сырье. Смесь кусочков листьев, стеблей, изредка бутонов, цветков и плодов различной формы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм.

Цвет листьев светло-зелёный, зелёный, коричневато-зелёный, цвет стеблей снаружи светло-зелёный, зелёный, коричневато-зелёный, иногда встречаются фрагменты стеблей в продольном сечении, имеющие беловато-жёлтую внутреннюю поверхность. Цвет плодов - чёрный, светло- или тёмно-коричневый. Запах слабый характерный.

Порошок. Смесь кусочков стеблей, листьев, бутонов, цветков и плодов, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

Цвет от светло-зелёного до зелёного и коричневато-зелёного с многочисленными беловато-жёлтыми вкраплениями. Запах слабый характерный.

Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микроскопический и микрохимический анализ сырья и лекарственных средств природного происхождения».

Цельное сырье, измельчённое сырье. При рассмотрении микропрепаратов листа с поверхности должны быть видны клетки верхнего и нижнего эпидермиса с тонкими извилистыми стенками. Устьица мелкие, окружены 4-6 околоустьичными клетками (аномоцитный тип), расположены в основном на нижней стороне листовой пластинки, на верхней отсутствуют или встречаются единично. На верхней стороне листа по жилкам видны некрупные, одноклеточные, прямые или слегка изогнутые толстостенные волоски с грубобородавчатой поверхностью. На обеих сторонах листа по жилкам и на краевых зубцах встречаются булавовидные железки с многоклеточной двурядной ножкой и овальной многоклеточной головкой с содержимым коричневого цвета. Верхушка листа заканчивается небольшим, закругленным выступом - шипиком-гидатодой с водяными устьицами. Вдоль жилок с нижней стороны листа встречается кристаллоносная обкладка. С обеих сторон листа наблюдается складчатость кутикулы, особенно по крупным жилкам.

При рассмотрении микропрепаратов поперечного среза стебля должно быть видно, что срез неправильный, трёх- или четырехгранный, с вытянутыми ребристыми углами. Клетки эпидермиса мелкие прямоугольные, тонкостенные практически одинаковые по размерам, покрыты толстой кутикулой. Встречаются редкие одноклеточные игловидные волоски. Колленхима представляет собой 1-3 слоя плотно сложенных паренхимных клеток. Паренхима первичной коры имеет хорошо развитую сеть межклетников. В клетках паренхимы наблюдаются многочисленные хлоропласты, встречаются включения в виде крупных призматических кристаллов оксалата кальция. Механические элементы в первичной коре представлены волокнами, которые окружают практически сплошным кольцом флоэмную часть стебля. Флоэма граничит с камбием. Древесина рассеянно-сосудистого типа с цепочками из однорядных сердцевинных лучей. Сердцевина состоит из крупных клеток паренхимы с лигнифицированными сильно утолщёнными стенками. Клетки сердцевины содержат большое количество крахмальных зерен.

Порошок. При рассмотрении микропрепарата должны быть видны фрагменты эпидермиса листьев с извилистыми тонкостенными клетками и устьицами аномоцитного типа. По жилкам, а также на фрагментах края листа часто встречаются булавовидные железки с многоклеточной двурядной ножкой и овальной многоклеточной головкой с содержимым коричневого цвета. На верхней стороне листа по жилкам видны грубобородавчатые, толстостенные одноклеточные прямые или изогнутые волоски. Иногда наблюдается складчатость кутикулы, часто встречаются фрагменты жилок с кристаллоносной обкладкой. На фрагментах эпидермиса стебля можно увидеть прямоугольные клетки с прямыми боковыми стенками и устьицами с 6 сопровождающими клетками (аномоцитный тип), у каждой замыкающей клетки сбоку имеется по две узкие клетки, параллельные щели. Встречаются одноклеточные игловидные волоски и реже булавовидные железки. В поперечном сечении стебля видны клетки эпидермиса с толстым слоем кутикулы.

Рисунок – Черники обыкновенной побеги

1 - фрагмент эпидермиса с нижней стороны листа (200×);  2 - одноклеточные толстостенные грубобородавчатые волоски и места их прикрепления, складчатость кутикулы (200×);  3 - фрагмент эпидермиса над жилкой с верхней стороны листа со складчатостью кутикулы, чётковидная утолщенность клеток эпидермиса (200×);  4 - булавовидная железка (200×);  5 - кристаллоносная обкладка фрагмента листа (200×).

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Муравьиная кислота безводная—вода—этилацетат (8:10:80).

Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 2 мм. Около 1,0 г измельчённого сырья помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 10 мл спирта 70 %, нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 15 мин. После охлаждения полученное извлечение фильтруют через беззольный фильтр.

Раствор рутина. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5 мг рутина, растворяют в спирте 96 % при нагревании на водяной бане и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор гиперозида. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5 мг гиперозида, растворяют в спирте 96 % при нагревании на водяной бане и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Реактив для детектирования 1. Дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира раствор 1 % в спирте 96 %.

Реактив для детектирования 2. Макрогола 400 раствор спиртовой 5 %.

На линию старта пластинки полосами длиной 10 мм и шириной не более 2 мм наносят 10 мкл испытуемого раствора и по 5 мкл раствора рутина и раствора гиперозида. Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в предварительно насыщенную в течение не менее 30 мин камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 – 90 % длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры и сушат до удаления следов растворителей. Хроматограмму нагревают при температуре 100 - 105 °С в течение 1-3 мин. Тёплую пластинку опрыскивают реактивом для детектирования 1, сушат, затем опрыскивают реактивом для детектирования 2 и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

Результат

На хроматограмме раствора рутина и гиперозида  должна обнаруживаться зона адсорбции желтого, желто-оранжевого или желто-коричневого цвета (рутин) и над ней зона адсорбции желтого, желто-оранжевого или желто-коричневого цвета (гиперозид).

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться над линией старта зона адсорбции голубого цвета, 2 зоны адсорбции желтого, желто-оранжевого или желто-коричневого цвета – чуть ниже и выше зоны адсорбции рутина, яркая желто-оранжевая зона адсорбции чуть ниже зоны адсорбции гиперозида и менее выраженная желто-оранжевая зона адсорбции на уровне зоны адсорбции гиперозида, 3 зоны адсорбции желтого, желто-оранжевого, желто-коричневого или коричневато-оранжевого цвета выше зоны адсорбции гиперозида, над ними зона адсорбции голубого или синего цвета; допускается наличие других зон адсорбции.

Качественная  реакция

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 1 мм. Около 0,5 г измельчённого сырья кипятят с 10 мл воды в течение 3 мин и после охлаждения фильтруют.

К 3 мл фильтрата прибавляют 3 капли железа (III) аммония сульфата раствора 30 %; должно наблюдаться чёрно-синее окрашивание (дубильные вещества).

Испытания

Влажность. Не более 13,0 % (ОФС «Определение влажности лекарственных средств природного происхождения»).

Зола общая. Не более 4,0 % (ОФС «Зола общая»).

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 0,6 % (ОФС «Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте»).

Измельчённость сырья. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельчённости и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Измельчённое сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм - не более 5 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм - не более 5 %.

Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером  2 мм - не более 5 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм - не более 5 %.

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельчённости и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Почерневших листьев. Цельное сырье, измельчённое сырье: не более 3,5 %.

Стеблей, в том числе отделенных при анализе. Цельное сырье: не более 70 %.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельчённое сырье: не более 2 %.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельчённое сырье, порошок: не более 0,5 %.

Тяжёлые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС «Определение содержания тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Заражённость вредителями запасов. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Определение степени заражённости лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение

Сумма флавоноидов. Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Исходный раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 1 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельчённого сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 150 мл спирта 70 %, присоединяют к обратному холодильнику и кипятят на водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая колбу для смывания частиц сырья со стенок. Колбу с содержимым охлаждают, затем извлечение фильтруют через беззольный фильтр, смоченный спиртом 70 %, в мерную колбу вместимостью 200 мл. Фильтр помещают в колбу для экстрагирования и экстракцию 50 мл спирта 70 % повторяют еще один раз в течение 30 мин, охлаждают и фильтруют в ту же мерную колбу. Объём извлечений доводят спиртом 70 % до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 мл исходного раствора, прибавляют 5 мл алюминия хлорида раствора 4 % в спирте 96 %, 0,1 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объём раствора спиртом 96 % до метки.

Исходный раствор стандартного образца гиперозида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают около 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца гиперозида, прибавляют 20 мл спирта 96 % и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем раствор охлаждают, доводят его объем спиртом 96 % до метки.

Раствор стандартного образца гиперозида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 2,0 мл исходного раствора стандартного образца гиперозида, прибавляют 5 мл алюминия хлорида раствора 4 % в спирте 96 %, 0,1 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объём раствора спиртом 96 % до метки.

Раствор сравнения испытуемого раствора. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 мл исходного раствора, прибавляют 0,1 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объём раствора спиртом 96 % до метки.

Раствор сравнения стандартного образца гиперозида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 2,0 мл исходного раствора стандартного образца гиперозида и 0,1 мл уксусной кислоты ледяной, доводят объём раствора  спиртом 96 % до метки.

Через 40 мин измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 1 см относительно раствора сравнения.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца гиперозида относительно раствора сравнения стандартного образца гиперозида.

Содержание суммы флавоноидов в пересчёте на гиперозид и сухое сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

Допускается содержание суммы флавоноидов вычислять с использованием удельного показателя поглощения комплекса гиперозида с хлоридом алюминия в спирте 96 % по формуле:

Дубильные вещества. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение содержания дубильных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах» (метод 1; навеска сырья 1,0 г, измельчённого до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм; экстрагент – вода.)

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

Хранение. В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».