Кальция фолинат гидрат

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(2S)-[4-({[(6RS)-2-Амино-4-оксо-5-формил-1,4,5,6,7,8-гексагидроптеридин-6-ил]метил}амино)бензамидо]пентандиоат кальция (1:1) гидрат

Содержит:

- не менее 97,0 % и не более 102,0 % кальция фолината C₂₀H₂₁CaN₇O₇ в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество;

- не менее 7,54 % и не более 8,14 % кальция Ca (М.м. 40,08)·в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Кальция фолинат гидрат является высокотоксичным веществом. Необходимо принять меры для исключения возможности его вдыхания или контакта с кожей и слизистыми оболочками.

Все испытания выполняют, используя свежеприготовленные растворы, в защищённом от прямого света месте.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или светло-жёлтый аморфный или кристаллический порошок.

*Гигроскопичен. Проявляет полиморфизм.

Растворимость. Умеренно растворим в воде, практически не растворим в ацетоне и спирте 96 %.

*Аморфные формы могут образовывать пересыщенные водные растворы.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца кальция фолината.

Если спектры различаются, субстанцию и стандартный образец кальция фолината по отдельности растворяют в минимальных объёмах воды, добавляют по каплям ацетон до выпадения осадка и оставляют на 15 мин. Отделяют осадок на центрифуге, промывают его двумя объёмами ацетона, выпаривают досуха и незамедлительно записывают спектры сухих остатков.

2. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную  реакцию А на кальций (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +14,4 до +18,0 в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество (раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», ОФС «Оптическое вращение»).

Прозрачность раствора. Растворяют 1,25 г субстанции в воде, свободной от углерода диоксида, при необходимости нагревая до температуры 40 °С, и доводят объём раствора тем же растворителем до 50,0 мл. Раствор должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Оптическая плотность. Оптическая плотность раствора субстанции, полученного в испытании «Прозрачность раствора», измеренного в максимуме поглощения при длине волны 420 нм, в кювете с толщиной слоя 1 см, не должна превышать 0,6 (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

рН раствора. От 6,8 до 8,0 (раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Буферный раствор. Растворяют 1,42 г динатрия гидрофосфата дигидрата в воде, прибавляют 4,0 мл тетрабутиламмония дигидрофосфата раствора 1 М, доводят значение рН раствора до 7,7 фосфорной кислотой концентрированной или натрия гидроксида раствором 8,5 % и доводят объём раствора водой до 835 мл.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол—буферный раствор 165:835.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца кальция фолината. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца кальция фолината, растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы.

В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 5,0 мг фармакопейного стандартного образца кальция фолината (содержащего примеси A, E и F) и доводят объём раствора водой до метки.

Примечание

Примесь A: 2-(4-Аминобензамидо)пентандиовая кислота, CAS 4271-30-1.

Примесь В: (2S)-2-(4-{N-[(2-Амино-4-оксо-5-формил-1,4,5,6,7,8-гексагидроптеридин-6-ил)метил]формамидо}бензамидо)пентандиовая кислота, CAS 98814-60-9.

Примесь С: (2S)-2-(4-{[(2-Амино-4-оксо-1,4-дигидроптеридин-6-ил)метил]амино}бензамидо)пентандиовая кислота, CAS 59-30-3.

Примесь D: (2S)-2-(4-{N-[(2-Амино-4-оксо-1,4-дигидроптеридин-6-ил)метил]формамидо}бензамидо)пентандиовая кислота (формилфолиевая кислота), CAS 134-05-4.

Примесь E: 4-({[(6RS)-2-Амино-4-оксо-5-формил-1,4,5,6,7,8-гексагидроптеридин-6-ил]метил}амино)бензойная кислота, CAS 4349-43-3.

Примесь F: (2S)-2-(4-{N-[(2-Амино-4-оксо-1,4,7,8-тетрагидроптеридин-6-ил)метил]формамидо}бензамидо)пентандиовая кислота, CAS 28459-40-7.

Примесь G: (2S)-2-(4-{[(2-Амино-4-оксо-1,4,7,8-тетрагидроптеридин-6-ил)метил]амино}бензамидо)пентандиовая кислота, CAS 4033-27-6.

Хроматографические условия

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Кальция фолинат –1 (около 13,9 мин); примесь Е – около 0,4; примесь А – около 0,6; примесь F – около 0,7.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей A, E, F используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу кальция фолината, хроматограмму прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу кальция фолината для проверки пригодности хроматографической системы (содержащему примеси A, E и F) и хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы.  

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками примеси А и примесью F должно быть не менее 2,0.

Поправочные коэффициенты. Для расчёта содержания площадь пика примеси A, E и F умножают на 0,6.

Допустимое содержание примесей. Содержание каждой из примесей A, E и F и любой другой примеси в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):

- примеси A – не более 0,3 %;

- примеси E – не более 0,3 %;

- примеси F – не более 0,3 %;

- любая другая примесь – не более 0,20 %;

- сумма примесей – не более 1,5 %.

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,05 % от площади пика фолината на хроматограмме раствора сравнения.

Вода. Не более 17,0 %. (ОФС «Определение воды», метод 1). Растворяют 0,1 г (точная навеска) субстанции в смеси 50 мл растворителя для титрования и 15 мл формамида, перемешивают в течение 6 мин перед титрованием и используют титрант, не содержащий пиридин.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Хлориды. Не более 0,5 %. Растворяют 0,3 г субстанции в 50 мл воды, при необходимости нагревая до температуры 40 °С, прибавляют 10 мл азотной кислоты 2 М раствора и титруют 0,005 М раствором серебра нитрата. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»).

1 мл 0,005 М раствора нитрата серебра соответствует 0,177 мг хлора.

Тяжёлые металлы. Не более 0,002 % (ОФС «Тяжёлые металлы», метод 9). Определение проводят в зольном остатке, полученном после сжигания 0,2 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.

**Бактериальные эндотоксины. Не более 0,4 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС «Бактериальные эндотоксины»). В мерную колбу вместимостью 10 мл  помещают 10 мг субстанции, растворяют в воде для БЭТ и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Кальций. Определение проводят методом титриметрии, в соответствии с ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)».

Растворяют в воде 0,5 г (точная навеска) субстанции и доводят объём раствора до 100 мл тем же растворителем. Далее поступают в соответствии с ОФС «Комплексонометрическое титрование (кальций, способ 1)».

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,05 М раствора натрия эдетата соответствует 2,004 мг кальция.

Кальция фолинат. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Хроматографируют раствор стандартного образца кальция фолината и испытуемый раствор.

Содержание кальция фолината C₂₀H₂₁CaN₇O₇ в субстанции в процентах (X), в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке, в сухом, защищённом от света месте.

*Приводится для информации.

** Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.