Дакарбазин

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 

 

 

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

 

Дакарбазин		ФС.2.1.0258
Дакарбазин
Dacarbazinum		Вводится впервые

 

 

C6H10N6O	М.м. 182,18
[4342-03-4]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

5-(1,1-Диметилтриаз-2-ен-3-ил)-1H-имидазол-4-карбоксамид.

Cодержит не менее 98,5 % и не более 101,0 % дакарбазина C₆H₁₀N₆O в пересчёте на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или слегка желтоватый кристаллический порошок.

Растворимость. Мало растворим в воде и спирте 96 %, практически нерастворим в метиленхлориде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца дакарбазина.

2. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 15 мг субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,1 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора хлористоводородной кислотой раствором 0,1 М до метки.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 200 до 400 нм должен иметь максимум при 323 нм и плечо при 275 нм с удельным показателем поглощения от 1024 до 1131. В качестве раствора сравнения используют хлористоводородной кислоты раствор 0,1 М.

3. Тонкослойная хроматография (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F₂₅₄.

Подвижная фаза (ПФ). Уксусная кислота ледяная—вода—бутанол 10:20:50.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 2 мг субстанции, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца дакарбазина. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 2 мг фармакопейного стандартного образца дакарбазина, растворяют в метаноле и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора и раствора стандартного образца дакарбазина. Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около 80–90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат на воздухе до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению и величине должна соответствовать зоне адсорбции дакарбазина на хроматограмме раствора стандартного образца дакарбазина.

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность раствора. Раствор 0,25 г субстанции в 25 мл лимонной кислоты раствора 1 М должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном BY₆ (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

Родственные примеси

1. Примесь D. Не более 0,05 %. Определение проводят методом ГХ (ОФС «Газовая хроматография»).

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Испытуемый раствор. Растворяют 0,5 г субстанции в 5 мл этилацетата, фильтруют через мембранный фильтр через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,25 г по массе  диметиламина раствора концентрированного (эквивалентно 0,5 г примеси D) и доводят объём раствора этилацетатом до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора этилацетатом до метки.

Примечание

Примесь D (диметиламин): N-метилметанамин, CAS 124-40-3.

Хроматографические условия

Колонка		кварцевая капиллярная, 30 м × 0,53 мм, покрытая слоем макрогола, деактивированного по отношению к основаниям, 1 мкм;
Детектор		пламенно-ионизационный;
Газ носитель		гелий для хроматографии;
Деление потока		1:10;
Скорость потока		3 мл/мин;
Объем пробы		1 мкл.

Температурная программа

	Время, мин	Температура, °C
Колонка	0–1	40
	1–6	40 → 50
	6–12	50 → 200
	12–22	200
Инжектор		180
Детектор		220

Хроматографируют раствор сравнения и испытуемый раствор.

Время удерживания примеси D – около 3 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения относительное стандартное отклонение площади пика примеси D должно быть не более 5,0 % (6 введений).

Содержание примеси D в субстанции в процентах (Х) вычисляют по формуле:

где	S1	–	площадь пика примеси D на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	–	площадь пика примеси D на хроматограмме раствора сравнения;
	a1	–	навеска субстанции, мг;
	a0	–	навеска диметиламина раствора концентрированного, мг;
	P	–	содержание диметиламина в диметиламина растворе концентрированном, %.

2. Другие примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»), последовательно применяя метод 1 и метод 2.

Метод 1

Все растворы используют свежеприготовленными и защищают от света. После завершения анализа или в конце дня колонку промывают смесью метанол—вода 1:1 в течение не менее 2 ч.

Буферный раствор. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 500 мл воды, прибавляют 15,63 г уксусной кислоты ледяной, перемешивают, прибавляют 2,33 г натрия докузата и доводят объём раствора водой до метки. Раствор используют свежеприготовленным.

Подвижная фаза (ПФ). Буферный раствор.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 50,0 мг субстанции и 75 мг лимонной кислоты моногидрата, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца примеси А. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мг фармакопейного стандартного образца примеси А, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Примечание

Примесь А: 3,7-Дигидро-4H-имидазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4-он, CAS 4656-86-4.

Хроматографические условия

Колонка	250 × 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	25 °С;
Скорость потока	1,2 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 254 нм;
Объём пробы	25 мкл;
Время хроматографирования	3-кратное от времени удерживания пика примеси А.

Хроматографируют раствор стандартного образца примеси А и испытуемый раствор.

Время удерживания примеси А – около 3 мин.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси A не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора стандартного образца примеси А (не более 0,2 %);

- площадь пика любой другой примеси, элюируемой после примеси А, не должна превышать 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора стандартного образца примеси А (не более 0,1 %).

Метод 2

Определение проводят в условиях метода 1 со следующими изменениями.

Подвижная фаза (ПФ). Буферный раствор—метанол 450:550.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца примеси В. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мг фармакопейного стандартного образца примеси В, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца примеси В, прибавляют 0,5 мл испытуемого раствора, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора водой до метки.

Примечание

Примесь В: 5-Амино-1H-имидазол-4-карбоксамид, CAS 360-97-4.

Хроматографические условия

Объём пробы	10 мкл;
Время хроматографирования	2-кратное от времени удерживания пика дакарбазина.

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор стандартного образца примеси В, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Дакарбазин –1 (около 27 мин); лимонная кислота – около 0,05; примесь В – около 0,8.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками примеси В и дакарбазина должно быть не менее 1,5.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси В не должна превышать площадь соответствующего пика на хроматограмме раствора стандартного образца примеси В (не более 0,1 %);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика дакарбазина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1 %);

- сумма площадей всех примесей не должна превышать пятикратную площадь пика дакарбазина на растворе сравнения (не более 0,5 %).

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,5 площади дакарбазина на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05 %) и пик лимонной кислоты.

Вода. Не более 0,5 % (ОФС «Определение воды», метод 1, методика Б). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,002 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы», метод 3А, в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

*Бактериальные эндотоксины. Не более 0,2 ЕЭ на 1 мг дакарбазина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).

Растворяют 0,15 г (точная навеска) субстанции в 30 мл уксусной кислоты безводной и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора хлорной кислоты соответствует 18,22 мг дакарбазина C₆H₁₀N₆O.

ХРАНЕНИЕ

В защищённом от света месте при температуре от 2 до 8 °С.

 

*Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения