Азатиоприн

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 

 

 

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

 

Азатиоприн		ФС.2.1.0251
Азатиоприн
Azathioprinum		Взамен ФС 42-1497-94

 

 

C9H7N7O2S	М.м. 354,48
[446-86-6]

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

6-[(1-Метил-4-нитро-1H-имидазол-5-ил)сульфанил]-7H-пурин.

Содержит не менее 98,5 % и не более 101,0 % азатиоприна C₉H₇N₇O₂S в пересчёте на сухое вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Светло-жёлтый порошок.

Растворимость. Растворим в натрия гидроксида растворе 5 %, мало растворим в разведённых минеральных кислотах, практически нерастворим в воде и спирте 96 %.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца азатиоприна.

2. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 г субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,1 М и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 230 до 350 нм должен иметь максимум при 280 нм и минимум при 242 нм. В качестве раствора сравнения используют хлористоводородной кислоты раствор 0,1 М.

ИСПЫТАНИЯ

Кислотность или щёлочность. Встряхивают 0,5 г субстанции с 25 мл воды, свободной от углерода диоксида в течение 15 мин и фильтруют. К 20 мл фильтрата прибавляют 0,1 мл метилового красного спиртовой раствор 0,1 %. Окраска раствора должна изменяться при прибавлении не более 0,1 мл 0,02 М раствора натрия гидроксида или 0,02 М раствора хлористоводородной кислоты.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Буферный раствор. В химический стакан вместимостью 1000 мл помещают 2,76 г натрия дигидрофосфата моногидрата, растворяют в 900 мл воды, доводят рН раствора до 2,50±0,05 с помощью фосфорной кислоты концентрированной, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объём раствора водой до метки.

Растворитель. Натрия гидроксида раствор 0,02 М.

Подвижная фаза А (ПФА). Метанол—буферный раствор 50:950.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Буферный раствор—метанол 400:600.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в 35 мл растворителя и доводят объём раствора буферным раствором до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объём раствора буферным раствором до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объём раствора буферным раствором до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы (А). В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца примеси А и 5 мг меркаптопурина (примесь В), растворяют в 8,75 мл растворителя и доводят объём раствора буферным раствором до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора, прибавляют 35 мл растворителя и доводят объём раствора буферным раствором до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы (Б). В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 2,5 мг фармакопейного стандартного образца примеси G и 2,5 мг субстанции, растворяют в 8,8 мл растворителя и доводят объём раствора буферным раствором до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл полученного раствора, прибавляют 17,5 мл растворителя и доводят объём раствора буферным раствором до метки.

Примечание

Примесь А: 1-метил-4-нитро-1H-имидазол-5-амин, CAS 4531-54-8.

Примесь B (меркаптопурин): 7H-пурин-6-тиол, CAS 50-44-2.

Примесь G: 6-[(1-метил-4-нитро-1H-имидазол-5-ил)сульфанил]-7H-пурин-2-амин, CAS 5581-52-2.

Хроматографические условия

Колонка	150 × 4,6 мм силикагель фенилсилильный для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	30 °С;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 240 нм;
Объём пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы (А), раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы (Б), раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Азатиоприн – 1 (около 15 мин); примесь А – около 0,3; примесь В – около 0,4; примесь G– около 0,97.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей А и В используют относительное время удерживания соответствующих примесей и хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы (А). Для идентификации пика примеси G используют относительное время удерживания соединения и хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы (Б).

Пригодность хроматографической системы

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы (А) разрешение (R_S) между пиками примеси А и примеси В должно быть не менее 2,0.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы (Б) разрешение (R_S) между пиками примеси G и азатиоприна должно быть не менее 2,0.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площади пика каждой из примесей А и В не должны более чем в 1,5 раза превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15 %);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,10 %);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна более чем в 5 раз превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05 %).

Потеря в массе при высушивании. Не более 1,0 % (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжёлые металлы. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы», метод 3А, в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Кислотно-основное титрование в неводных средах»).

Растворяют 0,25 г (точная навеска) субстанции в 25 мл диметилформамида и титруют 0,1 М раствором тетрабутиламмония гидроксида. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствором тетрабутиламмония гидроксида соответствует 27,73 мг азатиоприна C₉H₇N₇O₂S.

ХРАНЕНИЕ

В защищённом от света месте.