ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранная в фазу цветения и высушенная трава культивируемого многолетнего травянистого растения вербены лекарственной – Verbena officinalis L., сем. вербеновые – Verbenaceae.

Содержание: не менее 1,5 % вербеналина в пересчёте на сухое сырьё.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внешние признаки (ОФС «Трава»).

Цельное сырьё. Цельные или частично измельчённые стебли с листьями и цветками. Стебли четырёхгранные, бороздчатые, опушённые. Крупные листья черешковые, супротивные, перистолопастные, край листа зубчатый; мелкие листья бесчерешковые, не разделённые на лопасти с городчатыми или зубчатыми краями; верхняя поверхность грубая, покрытая колючими волосками, расположенными, в основном, по жилкам, которые хорошо видны с нижней стороны листовой пластины. Цветки многочисленные, расположенные на тонком шипе в пазухах листа наподобие прицветников; трубчатая чашечка имеет 5 заострённых лепестков; венчик в форме трубочки, которая вдвое длиннее чашечки.

Цвет стеблей зеленовато-коричневый; листьев – серо-зелёный;
венчика - от светло-розового до фиолетово-красного.

          Запах характерный.

Порошок. Смесь частиц листьев, цветков и стеблей, проходящих сквозь сито с размером отверстий 2 мм. Цвет от серовато-зелёного до зеленовато-коричневого с вкраплениями от светло-розового до фиолетово-красного цвета.

Запах характерный.

Микроскопические признаки (ОФС «Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения», раздел «Трава»).

Цельное сырьё. При рассмотрении листа с поверхности должны быть видны клетки верхнего и нижнего эпидермиса с извилистыми стенками, с нижней стороны листа стенки более извилистые. Устьица с обеих сторон листа аномоцитного и анизоцитного типа; более многочисленные на нижнем эпидермисе. Волоски представлены 2 типами: длинными простыми одноклеточными кроющими толстостенными волосками, в месте прикрепления которых эпидермис образует розетку, и простыми короткими кроющими волосками; головчатыми волосками с короткой одноклеточной ножкой и с многоклеточной головкой и головчатыми волосками с длинной одноклеточной ножкой, короткой клеткой «шейки» (клетка между ножкой и головкой) и уплощённой, вертикально разделённой головкой. Эпидермис стебля представлен многоугольными, прямоугольными клетками с утолщёнными стенками и устьицами аномоцитного и анизоцитного типа. В «давленом» микропрепарате стебля должны быть видны склеренхимные волокна, лестничные и сетчатые сосуды. В микропрепарате также должна обнаруживаться пыльца треугольной или округлой формы, трёхбороздная с гладкой экзиной.

Порошок. При рассмотрении микропрепаратов должны быть видны фрагменты эпидермиса с извилистыми стенками, с устьицами аномоцитного и анизоцитного типа; с волосками двух типов: длинными простыми одноклеточными кроющими толстостенными волосками, в месте прикрепления которых эпидермис образует розетку, и простыми короткими кроющими волосками; головчатыми волосками с короткой одноклеточной ножкой и с многоклеточной головкой и головчатыми волосками с длинной одноклеточной ножкой, короткой клеткой «шейки» (клетка между ножкой и головкой) и уплощённой, вертикально разделённой головкой; фрагменты склеренхимных волокон, лестничные и сетчатые сосуды; пыльца треугольной или округлой формы, трёхбороздная с гладкой экзиной.

Рисунок – Вербены лекарственной трава

1 – верхний эпидермис листа с устьицами аномоцитного и анизоцитного типа (400×);
2 – короткий простой одноклеточный кроющий волосок и головчатый волосок с одноклеточной ножкой и многоклеточной головкой (400×); 3 – головчатый волосок с длинной одноклеточной ножкой, короткой клеткой «шейки» (клетка между ножкой и головкой) и уплощённой, вертикально разделённой головкой (400×); 4 – пыльца (400×).

Определение основных групп биологически активных веществ

ТСХ. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля [для ВЭТСХ пластинка со слоем силикагеля].

Подвижная фаза (ПФ). Муравьиная кислота безводная – уксусная кислота ледяная –  вода – этилацетат (11:11:27:100).

Испытуемый раствор. В колбу вместимостью 100 мл помещают 0,5 г измельчённого сырья, прибавляют 5 мл метанола, нагревают на водяной бане при температуре 60 ^оС в течение 10 мин, охлаждают и фильтруют через фильтр.

Раствор сравнения. Растворяют в 10,0 мл метанола 10 мг арбутина и 10 мг рутина.

Реактив для детектирования. Анисового альдегида раствор уксуснокислый в метаноле.

На линию старта пластинки в виде полос длиной 10 мм [для ВЭТСХ 8 мм] и шириной 2 мм наносят по 20 мкл [для ВЭТСХ 5 мкл] испытуемого раствора и стандартного раствора. Пластинку с нанесёнными пробами сушат на воздухе, помещают в предварительно насыщенную в течение 1 ч камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдёт около 80 – 90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают реактивом для детектирования, выдерживают при температуре 100–105 °С в течение 10 мин и просматривают при дневном свете.

Результат

На хроматограмме раствора сравнения должны обнаруживаться: зона адсорбции тёмного коричневато-жёлтого цвета (рутин) и над ней зона адсорбции от синего до коричневого цвета (арбутин).

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться: зона адсорбции коричневато-серого цвета между зонами адсорбции рутина и арбутина; зона адсорбции коричневого или зелёного цвета выше зоны адсорбции арбутина; допускается обнаружение других зон адсорбции.

Примечание – На хроматограмме испытуемого раствора не должна обнаруживаться интенсивная зона адсорбции синего или фиолетового цвета на уровне зоны адсорбции рутина (другие виды вербены).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность (ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения»). Не более 10,0 %. Определение проводят с использованием 1,00 г испытуемого образца.

Зола общая (ОФС «Зола общая»). Не более 10,0 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (ОФС «Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте»). Не более 2,0 %.

Измельчённость сырья (ОФС «Определение подлинности, измельчённости и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах»).

Цельное сырьё: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм: не более 5 %.

Порошок:

- частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм: не более 5 %;

- частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм: не более 5 %.

Допустимые примеси (ОФС «Определение подлинности, измельчённости и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах»).

Органическая примесь. Не более 1 %.

Минеральная примесь. Не более 1 %.

Тяжёлые металлы и мышьяк (ОФС «Определение содержания тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах»).

Радионуклиды (ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах»).

Остаточные количества пестицидов (ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах»).

Заражённость вредителями запасов (ОФС «Определение степени заражённости лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов»).

Микробиологическая чистота (ОФС «Микробиологическая чистота»).

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Метод ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза А (ПФА). Фосфорная кислота разведённая 0,3 %.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм.
В колбу вместимостью 250 мл помещают 1,0 г (точная навеска) измельчённого сырья прибавляют 50,0 мл раствора внутреннего стандарта и перешивают на магнитной мешалке в течение 2 ч, затем центрифугируют при 2500 g в течение 15 мин, надосадочую жидкость фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Раствор внутреннего стандарта. 0,01 г (точная навеска) феруловой кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в спирте 60 % и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца вербеналина. 0,011 г (точная навеска) фармакопейного стандартного образца вербеналина помещают в мерную колбу вместимостью 5 мл, растворяют в растворе внутреннего стандарта и доводят объём раствора тем же растворителем до метки.

Хроматографические условия

Режим хроматографирования

Хроматографируют раствор стандартного образца вербеналина и испытуемый раствор.

Относительное время удерживание (время удерживания
вербеналина – около 11 мин): феруловая кислота  – 2,1; актеозид – 2,4.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме испытуемого раствора  разрешение (R_S) не менее 3,5 между пиками феруловой кислоты и актеозида.

Содержание вербеналина в пересчёте на сухое сырьё в процентах (Х) вычисляют по формуле:

Х = ,

УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ПЕРЕВОЗКА

В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

ХРАНЕНИЕ

В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».