-
- Главная
- Фармакопея
- ФСО
- Общая информация
Издание: | Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания |
Раздел: | Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания |
Связанные ФСО карточки: | |
Тип: | Фармакопейная статья (ФС) |
Внутр.№: | 6419.1 |
Статус: | Проект в работе |
Экспертная секция: | Секция стандартизации биологических лекарственных средств |
Рассмотрение Фармакопейного комитета: | Одобрено ФК |
Рассмотрение экспертной секцией: | Одобрено экспертной секцией |
Публичное Обсуждение проекта: | Обсуждение завершено |
Обсуждение проекта | закончилось 06.05.2024 |
(2S)-2-Амино-3-(1H-индол-3-ил)пропановая кислота.
Субстанция, получаемая путём ферментации или белкового гидролиза.
Содержание: от 98,5 % до 101,0 % триптофана C11H12N2O2 в пересчёте на сухое вещество.
Описание. Белый или почти белый кристаллический или аморфный порошок.
Растворимость. Умеренно растворим в воде, мало растворим в спирте 96 %. Растворяется в разведённых растворах минеральных кислот и щелочей.
Вторая идентификация: A, В, Г.
А. Удельное вращение (см. раздел Испытания).
Б. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»).
Образец сравнения: фармакопейный стандартный образец триптофана.
Требование: инфракрасный спектр поглощения триптофана должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца триптофана.
В. Тонкослойная хроматография (ОФС «Тонкослойная хроматография»).
Смесь растворителей: уксусная кислота ледяная – вода (50:50 об/об).
Испытуемый раствор. 10 мг испытуемого образца растворяют в смеси растворителей и доводят объём раствора той же смесью растворителей до 50 мл.
Раствор сравнения. 10 мг фармакопейного стандартного образца триптофана растворяют в смеси растворителей и доводят объём раствора той же смесью растворителей до 50 мл.
- ТСХ пластинка со слоем силикагеля;
- подвижная фаза: Уксусная кислота ледяная—вода—бутанол (20:20:60 об/об/об);
- наносимый объём пробы: 5 мкл;
- детектирование: опрыскивание нингидрина раствором 0,2 %, выдерживание в сушильном шкафу при температуре 105 °С в течение 15 мин.
Требования: на хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться основная зона адсорбции на уровне основной зоны адсорбции на хроматограмме раствора сравнения, соответствующая ей по величине и окраске.
20 мг испытуемого образца растворяют в 10 мл воды, прибавляют 5 мл диметиламинобензальдегида раствора и 2 мл 250 г/л хлористоводородной кислоты, нагревают на водяной бане; должно появиться фиолетово-синее окрашивание.
Прозрачность раствора (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).
0,1 г испытуемого образца растворяют в 1 М хлористоводородной кислоты растворе и доводят объём раствора тем же растворителем до 10 мл. Полученный раствор должен быть прозрачным.
Цветность раствора (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2). Окраска раствора, полученного в испытании «Прозрачность раствора» не должна быть интенсивнее окраски раствора сравнения BY6.
рН (ОФС «Ионометрия», метод 3). От 5,5 до 7,0.
1,0 г испытуемого образца растворяют в воде, и доводят объём раствора тем же растворителем до 100 мл.
Удельное оптическое вращение (ОФС «Оптическое вращение»).
От –33,0 до –30,0 в пересчёте на сухое вещество.
0,25 г испытуемого образца растворяют в воде, при необходимости нагревая на водяной бане, и доводят объём раствора тем же растворителем до 25,0 мл.
1. Нингидрин-положительные примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аминокислотный анализ» (метод 1).
Содержание каждой аминокислоты выражают в молях. Относительную долю аминокислот рассчитывают, принимая 1/6 часть от суммы количества молей глутаминовой кислоты, гистидина, тирозина, лейцина, аргинина и пролина, равной 1.
Требование: полученные значения должны находиться в следующих пределах: глутаминовая кислота, гистидин, тирозин, лейцин, аргинин и пролин – от 0,9 до 1,1;серин – от 1,6 до 2,2; других аминокислот – следовые количества, за исключением триптофана.
Концентрации испытуемого раствора и растворов сравнения могут быть изменены в зависимости от чувствительности используемого оборудования. Концентрации всех растворов корректируются таким образом, чтобы выполнялись требования пригодности системы, как описано в ОФС «Хроматография», с условием сохранения соотношения концентраций между всеми растворами.
Раствор А: хлористоводородная кислота разведённая 0,037 % или буфер для подготовки проб, подходящий для используемого аппарата.
Испытуемый раствор. 30,0 мг испытуемого образца растворяют в растворе А и доводят объём раствора раствором А до 50,0 мл.
Раствор сравнения (а). 1,0 мл испытуемого раствора доводят до объёма 100,0 мл раствором А. 2,0 мл полученного раствора доводят раствором А до объёма 10,0 мл.
Раствор сравнения (б). 30,0 мг L-пролина растворяют в растворе А и доводят раствором А до объёма 100,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят раствором А до объёма 250,0 мл.
Раствор сравнения (в). 6,0 мл аммония стандартного раствора 100 мкг/мл доводят раствором А до объёма 50,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят раствором А до объёма 100,0 мл.
Раствор сравнения (г). 30 мг L-изолейцина и 30 мг L-лейцина растворяют в растворе А и доводят объём раствора раствором А до 50,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят раствором А до объёма 200,0 мл.
Контрольный раствор: раствор А.
Вводят подходящие равные количества испытуемого, раствора сравнения и контрольного раствора в анализатор аминокислот. Запускают программу, подходящую для определения физиологических аминокислот.
Пригодность системы: раствор сравнения (г):
- разрешение (RS): не менее 1,5 между пиками изолейцина и лейцина.
Содержание любой нингидрин-положительной примеси, зарегистрированной при длине волны 570 нм, в субстанции в процентах () вычисляют по формуле:
площадь пика любой другой примеси на хроматограмме испытуемого раствора; |
|||
площадь
основного пика на хроматограмме раствора |
Содержание любой нингидрин-положительной примеси, зарегистрированный при длине волны 440 нм, в субстанции в процентах () вычисляют по формуле:
площадь пика любой примеси на хроматограмме испытуемого раствора; |
|||
площадь пика пролина на хроматограмме раствора сравнения (б); |
|||
навеска L-пролина, взятая для приготовления раствора сравнения (б), мг; |
|||
Если примесь регистрируется выше неучитываемого предела как при 570 нм, так и при 440 нм, для количественного расчёта используют результат, полученный при 570 нм.
- любая нингидрин-положительная примесь: не более 0,2 %;
- сумма примесей - не более 0,5 %;
- порог информирования: 0,05 %.
Пределы идентификации родственных примесей в фармацевтических субстанциях, указанные в таблице 1 ОФС «Фармацевтические субстанции», не применяются.
2. Примесь А и другие примеси (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы готовят непосредственно перед использованием.
Смесь растворителей: ацетонитрил – вода (10:90 об/об).
Буферный раствор. Растворяют 3,9 г калия дигидрофосфата в 1000 мл воды, прибавляют 700 мл 2,9 г/л фосфорной кислоты концентрированной и доводят значение рН до 2,3 фосфорной кислотой концентрированной.
Раствор внутреннего стандарта. 10,0 мг N-ацетилтриптофана растворяют в смеси растворителей и доводят объём раствора той же смесью растворителей до 100,0 мл. 2,0 мл полученного раствора доводят той же смесью растворителей до объёма 100,0 мл.
Испытуемый раствор (а). 0,10 г испытуемого образца растворяют в смеси растворителей и доводят объём раствора той же смесью растворителей до 10,0 мл.
Испытуемый раствор (б). 0,10 г испытуемого образца растворяют в растворе внутреннего стандарта и доводят объём раствора тем же раствором до 10,0 мл.
Раствор сравнения (а). Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца 1,1'-этилиденбистриптофана (примесь А) растворяют в смеси растворителей и доводят объём раствора той же смесью растворителей до 1,0 мл.
Раствор сравнения (б). Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца 1,1'-этилиденбистриптофана (примесь А) растворяют в растворе внутреннего стандарта и доводят объём раствора тем же раствором до 1,0 мл.
Раствор сравнения (в). 0,5 мл раствора сравнения (а) разводят смесью растворителей и доводят объём раствора той же смесью растворителей до 5,0 мл.
Примесь A (этан-1,1-диилбистриптофан): 3,3′-[этан-1,1-диилбис(1H-индол-1,3-диил)]бис[(2S)-2-аминопропановая кислота].
- колонка: длиной 0,25 м и внутренним диаметром 4,6 мм; заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии с размером частиц 5 мкм;
- подвижная фаза А: ацетонитрил – буферный раствор (115:885 об/об);
- подвижная фаза Б: ацетонитрил – буферный раствор (350:650 об/об).
- режим градиентного элюирования:
- скорость подвижной фазы: 0,7 мл/мин;
- детектор: спектрофотометрический, длина волны 220 нм;
- вводимый объём пробы: по 20 мкл испытуемого раствора (а), испытуемого раствора (б), раствора сравнения (б) и раствор сравнения (в).
Время удерживания. Триптофан – около 8 мин; N-ацетилтриптофан – около 29 мин; примесь А – около 34 мин.
Пригодность хроматографической системы:
- разрешение: не менее 8,0 между пиками N-ацетилтриптофана и примеси А на хроматограмме раствора сравнения (б). При необходимости регулируют временную программу для градиента элюирования (увеличение продолжительности элюирования подвижной фазой А приводит к увеличению времени удерживания и лучшему разрешению;
- отношение «сигнал/шум»: не менее 15 для основного пика на хроматограмме раствора сравнения (в);
- коэффициент асимметрии: не более 3,5 для пика примеси А на хроматограмме раствора сравнения (б);
- на хроматограмме испытуемого раствора (а) не должно быть пика с таким же временем удерживания, как у N -ацетилтриптофана (в этом случае корректируют площадь пика N -ацетилтриптофана).
Пределы содержания примесей: испытуемый раствор (б):
- примесь А: не более 0,001 % (10 ppm);
- сумма примесей, элюирующихся до основного пика: не более 0,01 %;
- сумма примесей, элюирующихся в интервале после основного пика и до 1,8-кратного времени удерживания пика N-ацетилтриптофана: не более 0,03 % (300 ppm);
Не учитывают пик N-ацетилтриптофана и пики, площадь которых составляет менее 0,02 площади пика N-ацетилтриптофана на хроматограмме раствора стандартного образца примеси А (менее 0,0004 %).
Остаточные органические растворители (ОФС «Остаточные органические растворители»).
Хлориды (ОФС «Хлориды»). Не более 200 ppm.
0,25 г испытуемого образца растворяют в 3 мл азотной кислоты разведённой 12,5 % и доводят объём раствора водой до 15 мл. При проведении испытания азотную кислоту к испытуемому раствору не прибавляют.
Сульфаты (ОФС «Сульфаты», метод 1). Не более 300 ppm.
0,5 г испытуемого образца растворяют в смеси хлористоводородная кислота разведённая 7,3 % – вода 5:25 и доводят объём раствора тем же растворителем до 15 мл.
Железо (ОФС «Железо», метод 2). Не более 20 ppm.
0,50 г испытуемого образца помещают в делительную воронку, растворяют в 10 мл хлористоводородной кислоты разведённой 7,3 %, экстрагируют тремя порциями метилизобутилкетона по 10 мл, каждый раз встряхивая в течение 3 мин, объединяют органические извлечения, прибавляют 10 мл воды и встряхивают в течение 3 мин. Используют водный слой.
Аминокислотный анализ проводят в соответствии с требованиями ОФС «Аминокислотный анализ», метод 1 в условиях, описанных в испытании на Нингидрин-положительные вещества со следующими изменениями.
Ввод проб: испытуемый раствор, раствор сравнения (в) и контрольный раствор.
- аммоний при длине волны 570 нм: на хроматограмме испытуемого раствора площадь пика аммония не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,02 %).
Потеря в массе при высушивании (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Не более 0,5 %.
1,000 г испытуемого образца высушивают в сушильном шкафу при температуре 105 °С.
Сульфатная зола (ОФС «Сульфатная зола» метод 1). Не более 0,1 %.
Определение проводят с использованием 1,0 г испытуемого образца.
Микробиологическая чистота. Испытуемый образец должен выдерживать требования испытания на микробиологическую чистоту.
Титриметрия (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).
0,150 г испытуемого образца растворяют в 3 мл муравьиной кислоты безводной, прибавляют 50 мл уксусной кислоты безводной и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»).
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл 0,1 М раствора хлорной кислоты соответствует 20,42 мг триптофана C11H12N2O2.