Определение уроновых кислот в полисахаридных вакцинах

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

В общей фармакопейной статье приведена методика определения уроновых кислот в полисахаридных вакцинах спектрофотометрическим методом.

Испытуемый раствор. В мерной колбе подходящего объёма готовят раствор с концентрацией около 5 мг/мл сухого полисахарида, используя воду. Разводят раствор так, чтобы объёмы, используемые в испытании, содержали от 4 мкг до 40 мкг глюкуроновой кислоты (уроновых кислот). В 3 пробирки помещают по 0,25 мл, 0,50 мл и 1,0 мл полученного раствора.

Растворы сравнения. 50 мг натрия глюкуроната растворяют в воде и доводят тем же растворителем до объёма 100,0 мл (основной раствор с концентрацией глюкуроновой кислоты 0,4 мг/мл). Непосредственно перед использованием 5,0 мл основного раствора разводят водой до объёма 50,0 мл (рабочее разведение с концентрацией глюкуроновой кислоты 0,04 мг/мл). В 5 пробирок помещают по 0,10 мл, 0,25 мл, 0,50 мл, 0,75 мл, и 1,0 мл рабочего разведения.

Компенсационный раствор. Готовят, используя 1,0 мл воды.

Доводят объём раствора в каждой пробирке водой до 1,0 мл. Помещают пробирки в ледяную баню и при постоянном перемешивании прибавляют в каждую пробирку по каплям по 5,0 мл натрия тетрабората раствора. Закрывают пробирки пробками и нагревают на водяной бане в течение 15 мин. Охлаждают до комнатной температуры. В каждую пробирку прибавляют по 0,20 мл раствора 1,25 г/л карбазола в этаноле. Закрывают пробирки пробками и нагревают на водяной бане в течение 15 мин. Охлаждают до комнатной температуры. Измеряют оптическую плотность (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях») каждого раствора при длине волны 530 нм.

Строят калибровочный график зависимости значений оптической плотности пяти растворов сравнения от концентрации глюкуроновой кислоты и с его помощью определяют концентрацию глюкуроновой кислоты в испытуемом растворе для каждого исследуемого объёма. Рассчитывают среднее по трём значениям концентрации глюкуроновой кислоты.