Определение О-ацетила в полисахаридных вакцинах

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

В общей фармакопейной статье представлена методика определения
O-ацетила в полисахаридных вакцинах методом спектрофотометрии.

Испытуемый раствор. В мерной колбе подходящего объёма готовят раствор с концентрацией сухого полисахарида около 5 мг/мл, используя воду. Разводят раствор так, чтобы объёмы, используемые в испытании, содержали от 30 мкг до 600 мкг ацетилхолина хлорида (O-ацетил). Помещают 0,3 мл, 0,5 мл и 1,0 мл полученного раствора в двух повторностях в 6 пробирок (3 реагирующих раствора и 3 корректирующих раствора).

Растворы сравнения. 0,150 г ацетилхолина хлорида растворяют в воде и доводят тем же растворителем до объёма 10,0 мл (основной раствор с концентрацией ацетилхолина хлорида 15 г/л). 1,0 мл основного раствора непосредственно перед использованием доводят водой до объёма 50,0 мл (рабочее разведение 1 с концентрацией ацетилхолина хлорида 300 мкг/мл). 1,0 мл основного раствора непосредственно перед использованием доводят водой до объёма 25,0 мл (рабочее разведение 2 с концентрацией ацетилхолина хлорида 600 мкг/мл). Помещают 0,1 мл и 0,4 мл рабочего разведения 1 в двух повторностях (реагирующий и корректирующий растворы) в 4 пробирки, 0,6 мл и 1,0 мл рабочего разведения 2 в двух повторностях (реагирующий и корректирующий растворы) в другие 4 пробирки.

Компенсационный раствор. Готовят, используя 1,0 мл воды.

Объём раствора в каждой пробирке доводят водой до 1,0 мл. В пробирки с корректирующим раствором и компенсационным раствором прибавляют по 1,0 мл раствора 412 г/л хлористоводородной кислоты и далее – по 2,0 мл гидроксиламина щелочного раствора 7 %. Выдерживают точно 2 мин для протекания реакции и прибавляют в пробирки с реагирующим раствором по 1,0 мл раствора 412 г/л хлористоводородной кислоты. В каждую пробирку прибавляют по 1,0 мл раствора 100 г/л железа(III) хлорида в растворе 10,3 г/л хлористоводородной кислоты, закрывают пробирки пробками и энергично встряхивают для удаления пузырьков.

Измеряют оптическую плотность (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях») растворов при длине волны 540 нм относительно компенсационного раствора. Из значения оптической плотности каждого реагирующего раствора вычитают значение оптической плотности соответствующего корректирующего раствора.

Строят калибровочный график зависимости скорректированных значений оптической плотности четырёх растворов сравнения от соответствующего содержания ацетилхолина хлорида и с её помощью определяют концентрацию ацетилхолина хлорида в испытуемом растворе для каждого исследуемого объёма. Рассчитывают среднее по трём значениям концентрации ацетилхолина хлорида.

1 моль ацетилхолина хлорида (181,7 г) соответствует 1 моль O-ацетила (43,05 г).