Определение метилпентоз в полисахаридных вакцинах

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

В общей фармакопейной статье приведена методика определения метилпентоз в полисахаридных вакцинах спектрофотометрическим методом.

Испытуемый раствор. В мерной колбе подходящего объёма готовят раствор с концентрацией около 5 мг/мл сухого полисахарида, используя воду. Разводят раствор так, чтобы объёмы, используемые в испытании, содержали от 2 мкг до 20 мкг рамнозы (метилпентоз). Помещают 0,25 мл, 0,50 мл и 1,0 мл полученного раствора в 3 пробирки.

Растворы сравнения. 0,100 г рамнозы растворяют в воде и доводят тем же растворителем до объёма 100,0 мл (основной раствор с концентрацией метилпентозы 1 мг/мл). Непосредственно перед использованием 1,0 мл основного раствора доводят водой до 50,0 мл (рабочее разведение с концентрацией метилпентозы 0,20 мг/мл). В 5 пробирок помещают 0,10 мл, 0,25 мл, 0,50 мл 0,75 мл и 1,0 мл рабочего разведения.

Компенсационный раствор. Готовят, используя 1,0 мл воды.

Объём в каждой пробирке доводят водой до 1,0 мл. Помещают пробирки в ледяную баню и при постоянном перемешивании прибавляют в каждую пробирку по каплям по 4,5 мл охлаждённой смеси вода – серная кислота концентрированная (1:6 об/об). Пробирки нагревают до комнатной температуры и выдерживают на водяной бане в течение нескольких минут. Охлаждают до температуры от 15 °С до 25 °С. В каждую пробирку прибавляют по 0,10 мл приготовленного непосредственно перед применением раствора 30 г/л L-цистеина гидрохлорида моногидрата. Встряхивают и выдерживают в течение 2 ч.

Измеряют оптическую плотность (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях») каждого раствора при длинах волн 396 нм и 430 нм. Для каждого раствора рассчитывают разницу между оптической плотностью, измеренной при длине волны 396 нм, и оптической плотностью, измеренной при длине волны 430 нм.

Строят калибровочный график зависимости разницы оптических плотностей для пяти растворов сравнения от соответствующей концентрации метилпентоз и с его помощью определяют содержание метилпентоз в испытуемом растворе для каждого исследуемого объёма. Рассчитывают среднее по трём значениям концентрации метилпентоз.