Определение гексозаминов в полисахаридных вакцинах

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

В общей фармакопейной статье приведена методика определения гексозаминов в полисахаридных вакцинах спектрофотометрическим методом.

Испытуемый раствор. В мерной колбе подходящего объёма готовят раствор с концентрацией около 5 мг/мл сухого полисахарида, используя воду. Разводят раствор так, чтобы объёмы, используемые в испытании, содержали от 125 мкг до 500 мкг глюкозамина (гексозамина). Помещают 1,0 мл полученного раствора в градуированную пробирку.

Растворы сравнения. 60 мг глюкозамина гидрохлорида растворяют в воде и доводят тем же растворителем до объёма 100,0 мл (содержит 0,5 мг/мл глюкозамина). В 4 градуированные пробирки помещают 0,25 мл, 0,50 мл, 0,75 мл и 1,0 мл полученного раствора.

Компенсационный раствор. Готовят, используя 1,0 мл воды.

Ацетилацетоновый реактив. Раствор готовят непосредственно перед использованием. Смешивают 1 объём ацетилацетона и 50 объёмов раствора 53 г/л натрия карбоната безводного.

Диметиламинобензальдегида раствор. Раствор готовят непосредственно перед использованием. 0,8 г диметиламинобензальдегида растворяют в 15 мл спирта 96 % и прибавляют 15 мл хлористоводородной кислоты.

Объём раствора в каждой пробирке доводят водой до 1,0 мл. В пробирки прибавляют по 1,0 мл раствора 292 г/л хлористоводородной кислоты, закрывают пробками, помещают в водяную баню на 1 ч и охлаждают до комнатной температуры. В каждую пробирку прибавляют по 0,05 мл раствора 5 г/л тимолфталеина в спирте 96 %. Прибавляют раствор 200 г/л натрия гидроксида до появления голубого окрашивания, а затем 1 М раствор хлористоводородной кислоты до обесцвечивания раствора. Объём раствора в каждой пробирке доводят водой до 10,0 мл (нейтрализованные гидролизаты).

Во вторую серию градуированных пробирок объёмом 10 мл помещают по 1,0 мл каждого нейтрализованного гидролизата. В каждую пробирку прибавляют по 1,0 мл ацетилацетонового реактива. Пробирки закрывают пробками, нагревают на водяной бане при температуре 90 °C в течение 45 мин. Охлаждают до комнатной температуры. В каждую пробирку прибавляют по 2,5 мл спирта 96 % и 1,0 мл диметиламинобензальдегида раствора, доводят объём растворов в пробирках спиртом 96 % до 10,0 мл. Пробирки закрывают, содержимое перемешивают, переворачивая пробирки, и выдерживают в тёмном месте в течение 90 мин.

Измеряют оптическую плотность (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях») каждого раствора при длине волны 530 нм.

Строят калибровочный график зависимости значений оптической плотности четырёх растворов сравнения от концентрации гексозамина и с его помощью определяют концентрацию гексозамина в испытуемом растворе.