Гистидина гидрохлорид моногидрат

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(2S)-2-Амино-3-(1H-имидазол-4-ил)пропановой кислоты гидрохлорид моногидрат.

Субстанция представляет собой продукт ферментации или белкового гидролиза.

Содержание: от 98,5 % до 101,0 % гистидина гидрохлорида в пересчёте на сухое вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы.

Растворимость. Легко растворим в воде, мало растворим в спирте 96 %.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Первая идентификация: А, Б, В, Е.

Вторая идентификация: A, Б, Г, Д, Е.

А. Удельное оптическое вращение (см. раздел Испытания).

Б. рН (см. раздел Испытания).

В. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»).

Образец сравнения: фармакопейный стандартный образец гистидина гидрохлорида моногидрата.

Г. Тонкослойная хроматография (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Испытуемый раствор. 10 мг испытуемого образца растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до 50 мл.

Раствор сравнения. 10 мг фармакопейного стандартного образца гистидина гидрохлорида моногидрата растворяют в воде и доводят объём раствора тем же растворителем до 50 мл.

Условия хроматографирования:

- ТСХ пластинка со слоем силикагеля;

- подвижная фаза: Уксусная кислота ледяная—вода—бутанол (20:20:60 об/об/об);

- наносимый объём пробы: 5 мкл;

- высушивание: на воздухе;

- детектирование: опрыскивание нингидрина раствором 0,2 %, выдерживание в сушильном шкафу при температуре 105 °С в течение 15 мин.

Требования: на хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться основная зона абсорбции на уровне основной зоны адсорбции на хроматограмме раствора сравнения, соответствующая ей по величине и окраске.

Д. Качественная реакция

Растворяют 0,1 г испытуемого образца в 7 мл воды и прибавляют 3 мл раствора 200 г/л натрия гидроксида. Растворяют 50 мг сульфаниловой кислоты в смеси 0,1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и 10 мл воды, прибавляют 0,1 мл раствора 100 г/л натрия нитрита. Смешивают полученные растворы, должно появиться оранжево-красное окрашивание.

Е. Качественная реакция

Испытуемый образец даёт реакцию на хлориды (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

ИСПЫТАНИЯ

Раствор S. 2,5 г испытуемого образца растворяют в воде свободной от диоксида углерода и доводят объём раствора тем же растворителем до 50 мл.

Прозрачность раствора (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»). Раствор S должен быть прозрачным.

Цветность раствора (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2). Окраска раствора S не должна быть интенсивнее окраски раствора сравнения BY₆.

pH (ОФС «Ионометрия», метод 3). От 3,0 до 5,0. Определение проводят с использованием раствора S.

Удельное оптическое вращение (ОФС «Оптическое вращение»).
От +9,2 до +10,6 в пересчёте на сухое вещество.

2,75 г испытуемого образца растворяют в 12,0 мл хлористоводородной кислоты 25 % и доводят объём раствора водой до 25,0 мл.

Родственные примеси

Нингидрин-положительные примеси (ОФС «Аминокислотный анализ», метод 1).

Концентрации испытуемого раствора и раствора сравнения могут быть адаптированы в соответствии с чувствительностью используемого оборудования. Концентрации всех растворов регулируются таким образом, чтобы выполнялись требования пригодности системы, как описано в ОФС «Хроматография», при этом соотношение концентраций между всеми растворами должно сохраняться.

Раствор А: вода или буфер для подготовки проб, подходящий для используемого аппарата.

Испытуемый раствор. 30,0 мг испытуемого образца растворяют в растворе А и доводят объём раствора раствором А до 50,0 мл.

Раствор сравнения (а). 1,0 мл испытуемого раствора разводят до объёма 100,0 мл раствором А. 2,0 мл полученного раствора доводят раствором А до объёма 10,0 мл.

Раствор сравнения (б). 30,0 мг L-пролина растворяют в растворе А и доводят раствором А до объёма 100,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят раствором А до объёма 250,0 мл.

Раствор сравнения (в). 6,0 мл аммония стандартного раствора (100 мкг/мл NH₄) разводят раствором А до объёма 50,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят раствором А до объёма 100,0 мл.

Раствор сравнения (г). 30 мг L-изолейцина и 30 мг L-лейцина растворяют в растворе А и доводят объём раствора раствором А до 50,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят раствором А до объёма 200,0 мл.

Контрольный раствор: раствор А.

Вводят подходящие равные количества испытуемого раствора, холостого раствора и растворов сравнения в анализатор аминокислот. Запускают программу, подходящую для определения физиологических аминокислот.

Пригодность системы: раствор сравнения (г):

- разрешение: не менее 1,5 между пиками L-изолейцина и L-лейцина.

Примечание

Примесь A (L-тирозин): (2S)-2-амино-3-(4-гидроксифенил)пропановая кислота.

Расчёт процентного содержания:

- для любой нингидрин-положительной примеси, обнаруженной при длине волны 570 нм, используют концентрацию гистидина гидрохлорида моногидрата в растворе сравнения (а);

- для любой нингидрин-положительной примеси, обнаруженной при длине волны 440 нм, используют концентрацию L-пролина в растворе сравнения (б); если пик превышает порог регистрации на обеих длинах волн, для количественного определения используют результат, полученный при длине волны 570 нм.

Пределы содержания примесей:

- любая нингидрин-положительная примесь: не более 0,2 % каждой примеси;

- сумма примесей: не более 0,5 %;

- порог информирования: 0,05 %.

Пределы идентификации родственных примесей в фармацевтических субстанциях, указанные в таблице 1 ОФС «Фармацевтические субстанции», не применяются.

Сульфаты (ОФС «Сульфаты», метод 2). Не более 300 ppm. Определение проводят с использованием раствора S.

10 мл раствора S доводят водой дистиллированной до объёма 15 мл.

Аммоний. Аминокислотный анализ проводят в соответствии с требованиями ОФС «Аминокислотный анализ», метод 1 в условиях, описанных в испытании на Нингидрин-положительные примеси со следующими изменениями:

Ввод проб: испытуемый раствор, раствор сравнения (с) и контрольный раствор.

Требование:

- аммоний при длине волны 570 нм: на хроматограмме испытуемого раствора площадь пика аммония не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (с) (не более 0,02 %), с учётом пика аммония на хроматограмме холостого раствора.

Железо (ОФС «Железо», метод 2). Не более 10 ppm.

1,0 г испытуемого образца помещают в делительную воронку, растворяют в 10 мл хлористоводородной кислоты разведённой 7,3 %, экстрагируют тремя порциями подготовленного метилизобутилкетона очищенного по 10 мл, каждый раз встряхивая в течение 3 мин, объединяют органические слои, прибавляют 10 мл воды и встряхивают в течение 3 мин. Для испытания используют водный слой.

Потеря в массе при высушивании (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). От 7,0 % до 10,0 %.

1,000 г испытуемого образца высушивают в сушильном шкафу при температуре 145–150 °С.

Сульфатная зола (ОФС «Сульфатная зола»). Не более 0,1 %.

Определение проводят с использованием 1,0 г испытуемого образца.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

0,160 г испытуемого образца растворяют в 50 мл воды свободной от диоксида углерода, и титруют 0,1 М раствором натрия гидроксида потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»).

1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 19,16 мг гистидина гидрохлорида C₆H₉N₃O₂·HCl.

ХРАНЕНИЕ

В защищённом от света месте.